引用本文： 石婕, 張欣, 王霄娜, 趙琦, 游啟生, 彭曉燕. 方向光相干斷層掃描觀察正常人視網膜外核層厚度分布及其影響因素. 中華眼底病雜志, 2020, 36(7): 526-532. doi: 10.3760/cma.j.cn511434-20191010-00319 復制
Henle纖維層（HFL）為外叢狀層（OPL）的外側部分，包含光感受器軸突和Müller細胞的一部分，黃斑區分布較多[1]。傳統OCT圖像中外核層（ONL）和HFL邊界不清，由于受制于OCT技術水平，并沒有獨立的ONL與HFL厚度測量[2-3]。新型頻域OCT（SD-OCT）可以測量活體視網膜ONL厚度，并通過改變探測光的入射角度觀察到HFL。在此基礎上，逐漸形成方向OCT（D-OCT）的概念。D-OCT利用Henle纖維放射狀走行及雙折射反射特性，可清晰顯示中心凹兩側的HFL[4-7]。目前國內外已有應用D-OCT分析健康人群ONL厚度的研究，但僅限于小樣本且未系統觀察年齡、性別對ONL厚度的影響[5-9]。本研究應用D-OCT測量了一組正常人視網膜ONL厚度，分析其隨年齡、性別及解剖部位的變化規律。現將結果報道如下。
1 對象和方法
橫斷面觀察性研究。遵循赫爾辛基宣言。所有受試者均自愿接受該項目并簽署書面同意書。
2017年8月至2019年1月于北京同仁醫院眼科就診且經常規檢查受檢眼無異常者及健康志愿者納入本研究。隨機選取右眼或左眼入組。詳細采集受試者全身病史、家族史信息；均行BCVA、裂隙燈顯微鏡、間接檢眼鏡、屈光度、眼壓、SD-OCT檢查。
納入標準：（1）BCVA≥20/25；（2）眼壓≤21 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）；（3）眼前節及眼底檢查未見異常；（4）SD-OCT檢查顯示平均視網膜厚度正常；（5）OCT圖像信號強度≥7。排除標準：（1）近視或遠視屈光度＞3.00 D，散光度數＞2.00 D；（2）既往有青光眼、視網膜疾病等病史；（3）屈光間質混濁；（4）既往有眼部手術史；（5）有糖尿病、高血壓等全身疾病史。
采用美國Carl Zeiss公司Cirrus HD-OCT5000儀5線高清單線掃描模式對黃斑區進行水平、垂直掃描。受試眼復方托吡卡胺滴眼液散瞳，瞳孔直徑＞6 mm。操作方法參考威斯康辛醫學院機構審查委員會提供的D-OCT操作標準。掃描模式：HD5-lineRaster（調整間隔0 mm），掃描線長度6 mm。水平掃描：視標位于瞳孔中央、顳側、鼻側；垂直掃描：視標位于瞳孔中央、下方、上方。受試者保持固定頭位，注視機器內固視標，入射光從瞳孔中央進入掃描，使成像中的視網膜水平；調整入射光于顳側距瞳孔中央約1.5～2.0 mm，得到傾斜掃描圖像；調整入射光于鼻側距瞳孔中央約1.5～2.0 mm，再次掃描（圖1）。開啟追蹤模式，保證3次掃描均為同一位置，減少眼球微小運動產生的掃描誤差，得到有清晰HFL、ONL分界線的圖像。按照同樣方法進行垂直掃描。
圖1
瞳孔不同位置入射光HFL反射特征SD-OCT像。白色線圈代表瞳孔，黃點代表入射光進入位點。1A示入射光從瞳孔鼻側進入，顳側弱反射區域呈現部分強反射即HFL（黃箭），鼻側HFL未顯現；1B示入射光從瞳孔中央進入，可見OPL為一薄層強反射結構，ONL為較寬的弱反射結構，未見HFL及HFL與ONL邊界；1C示入射光從顳側進入，鼻側弱反射信號區域部分呈強反射即HFL（黃箭）
利用Photoshop CC2019軟件對采集的左眼水平掃描圖像做水平翻轉處理，使得左、右眼掃描線均為顳側至鼻側，便于后續圖像分析。基于Matlab開發自動測量軟件（北京大恒技術公司），同時載入從瞳孔中央、顳側及鼻側入射掃描黃斑區同一部位的3張圖像，將傾斜圖像調整為水平，行偽彩標記并疊加為1張顯示中心凹兩側各3 mm的圖像。圖像疊加以3張圖像的內界膜、RPE層重合為準[6]（圖2）。在HFL上界、下界及外界膜（ELM）手動分層，Matlab軟件分析得到每個標記點的像素坐標，并計算對應點的ONL以及ONL+HFL厚度值。以黃斑中心為圓心，直徑1.5 mm范圍為中心凹，1.5～2.5 mm為旁中心凹，2.5～5.5 mm為中心凹周圍區，比較直徑5.5 mm范圍黃斑區不同區域ONL厚度隨年齡、性別改變的變化規律。由兩名操作者分別對隨機選取的9名受試者的同一只眼進行圖像采集，其中一名操作者為經培訓后的有經驗者，另一名操作者為無培訓經驗者。按照D-OCT操作標準進行掃描，比較兩者操作的一致性。圖像處理由上述經過培訓的操作者進行，包括標記、分層、測量，每張圖像進行3次測量，取平均值，并且在1周內進行2次重復測量，檢測同一名操作者標記測量的可靠性[8, 10]。
采用SPSS 25.0軟件進行統計分析。各層組織厚度采用均數±標準差（
）表示。利用Medcalc軟件進行Bland-Altman分析及計算組內相關系數（ICC）分析2名操作者測量的一致性及一名操作者對圖像標記測量的可靠性，ICC＞0.8為非常可靠[10-11]。年齡對ONL的影響行單因素方差分析；性別對ONL的影響行獨立樣本t檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。
2 結果
共入組67名67只眼。其中，男性27名27只眼，女性40名40只眼；右眼46只眼，左眼21只眼。年齡7～67歲，平均年齡為（39.97±16.98）歲。男性、女性平均年齡分別為（38.48±15.33）、（40.98±17.78）歲，差異無統計學意義（t=0.582，P=0.562）。年齡＜20、20～39、40～59、≥60歲者分別為11、22、22、12名，并據此分為A組、B組、C組、D組。Bland-Altman數據分析結果顯示，95%一致性界限（LOA）范圍較窄，且均值差異小（圖3）；ICC＞0.85。提示同一名操作者標記的重復性高；2名操作者掃描的一致性好。
圖3
差異對比均值Bland-Altman圖。3A、3B分別示不同操作者掃描的差異對比；3C、3D分別示同一名操作者圖像重復標記的差異對比。3A、3C和3B、3D圖中中央藍線分別代表中心凹ONL和ONL+HFL厚度差異均值；標記標出點代表每名受試者中心凹處ONL或ONL+HFL厚度；上下兩側紅色虛線表示LOA
2.1 解剖部位對ONL厚度的影響
水平掃描，隨離心率增大，ONL+HFL厚度先增大后降低。ONL+HFL厚度于鼻側和顳側距中心凹0.30 mm處最厚，分別為（112.42±12.17）、（112.10±11.30）μm；其后隨離心率增大，厚度逐漸降低（圖4A）。ONL厚度于中心凹最厚，為（88.66±13.62）μm；隨離心率增大，厚度逐漸降低，鼻側1.05 mm、顳側0.90 mm處分別為（33.68±6.65）、（34.05±6.02）μm。鼻側0.90 mm、顳側0.75 mm處ONL/ONL+HFL值最低，分別為36.1%、38.3%。
圖4
不同掃描方向ONL、ONL+HFL厚度變化。4A示水平掃描，T：顳側，N：鼻側；4B示垂直掃描，I：下方，S：上方
垂直掃描，隨離心率增大，ONL+HFL厚度先增大后降低。下方距中心凹0.15 mm、上方距中心凹0.30 mm處最厚，分別為（111.42±14.32）、（114.89±12.15）μm；其后隨離心率增大，厚度逐漸降低（圖4B）。ONL厚度于中心凹最厚，為（92.28±15.41）μm；其后隨離心率增大厚度逐漸降低，下方1.20 mm、上方1.05 mm處分別為（27.80±6.72）、（32.47±5.43）μm。下方0.75 mm、上方0.90 mm處ONL/ONL+HFL比值最小，分別為36.2%、35.6%。
2.2 年齡對ONL厚度的影響
不同年齡組受試者黃斑5.5 mm范圍中心凹及顳側旁中心凹ONL厚度比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；其余區域差異均有統計學意義（P＜0.05）。旁中心凹、中心凹周圍區4組間差值最大者分別為5.81、6.66 μm（表1）。
表1
不同年齡者組受試者黃斑5.5 mm范圍不同區域ONL厚度比較（μm, 
）
2.3 性別對ONL厚度的影響
黃斑5.5 mm范圍不同區域，除下方中心凹周圍區外，男性ONL厚度均大于女性，中心凹差異無統計學意義（P＞0.05）；中心凹周圍區下方無統計學意義（P＞0.05），其他區域差異均有統計學意義（P＜0.05）（表2，圖5）。
表2
不同性別者黃斑5.5 mm范圍不同區域ONL厚度比較（μm, 
）
圖5
不同性別者黃斑ONL厚度變化。5A示水平掃描， T：顳側，N：鼻側；5B示垂直掃描，I：下方，S：上方
3 討論
臨床上有多種眼底疾病與HFL關系密切，如黃斑囊樣水腫、中心性漿液性脈絡膜視網膜病變、老年性黃斑變性相關的地圖性萎縮、特發性黃斑裂孔等[12-13]。既往由于局限于傳統OCT技術水平及HFL獨特的排列方式，往往忽視HFL的存在或將正常HFL表現誤認為疾病的影像學特征[14]。D-OCT利用Henle纖維放射狀走行及雙折射反射特性，可清晰顯示中心凹兩側的HFL，能準確地對HFL及ONL進行定性及定量分析和定位病灶。Ouyang等[15]、翁銘等[9]分別觀察了D-OCT圖像上HFL正常形態和健康國人HFL的圖像特征。既往有學者觀察到OPL與ELM之間弱反射區域存在強反射，并認為是疾病所致ONL改變[14]。D-OCT掃描顯示該強反射區域為HFL[15]。因此，D-OCT可作為判定OPL與ELM之間病灶位置的一種可靠手段。另外，D-OCT還可用于定量分析ONL、HFL厚度，有助于觀察影響光感受器細胞疾病的進展及治療效果，判斷預后及治療終點。
本研究結果顯示，ONL厚度在距中心凹0.9～1.2 mm處最薄，水平徑線和垂直徑線上厚度存在差異，其原因可能與視錐、視桿細胞分布的空間差異性有關。Lujan等[6]研究發現，ONL在距中心凹0.8～1.0 mm處最薄，水平徑線和垂直徑線上厚度亦存在差異，本研究結果與此基本一致。本研究還發現，中心凹處ONL/ONL+HFL值最大，距中心凹0.75～0.90 mm處最小。Lujan等[6]發現上方、下方、鼻側、顳側距中心凹約0.75 mm處ONL/ONL+HFL值最小，約40%。這提示傳統標準OCT掃描所觀察到的“ONL”（實為ONL+HFL）厚度較真實ONL厚度誤差非常大。翁銘等[9]采用D-OCT掃描觀察了24名國人的HFL并分析其及ONL厚度，發現距中心凹0.75、1.50 mm處ONL厚度差異不明顯，各區域差值為2.87～8.23 μm。本研究較翁銘等[9]研究樣本量更大，受試眼均進行水平與垂直掃描，每條掃描線采集間隔為150 μm的40個點進行厚度分析，并且增加了年齡及性別分組研究，整體及個體研究均更全面。
本研究結果顯示，20～39歲者ONL厚度最厚，40～59歲者次之，＜20歲及≥60歲者厚度相近。Tong等[8]研究發現，較大年齡組受試者ONL厚度比年輕組厚，其差異中心凹較周邊更顯著，約為5.8～8.0 μm。但該研究樣本量小（按年齡分為2組，每組8人），年齡跨度大。Ooto等[16]認為ONL+OPL厚度并非隨年齡進展而變化。2017年，Nieves-Moreno等[17]納入297只眼，受試者年齡跨度18～87歲，結果顯示，OPL厚度隨年齡增加而增厚，ONL厚度隨年齡增加而變薄，約以每25年2.45 μm的速率變薄，但該項研究ONL為ONL+HFL，其結果仍有誤差。本研究結果與以上研究結果并非完全一致的原因可能是人種差異以及測量方法的不同。目前有關年齡與ONL厚度的研究均為橫斷面觀察，尚需進一步縱向研究結果加以證實。
本研究結果顯示，同一解剖位點男性ONL厚度較女性厚，旁中心凹及中心凹周圍區差異更顯著。Ooto等[16]研究發現，男性ONL+OPL厚度大于女性，但未單獨觀察ONL厚度變化。Won等[18]研究發現，女性平均ONL厚度較男性大，但ONL仍為ONL+HFL。Nieves-Moreno等[17]發現，與男性比較，女性ONL以及節細胞層、內叢狀層、內核層厚度更薄，該結果與本研究結果一致。
目前已有研究應用D-OCT分析部分眼底疾病中ONL厚度變化。Menghini等[19]應用D-OCT對正常人與視網膜色素變性患者ONL厚度進行比較，發現兩者ONL厚度差異無統計學意義。Lee等[20]應用D-OCT觀察白化病患者HFL及ONL厚度變化，發現白化病患者HFL較正常人偏厚，而ONL偏薄。
本研究為國內首次應用D-OCT對國人ONL厚度與解剖部位、性別、年齡變化的研究。為今后進一步探索影響ONL及HFL疾病如老年性黃斑變性、Stargardt病等病程進展及治療提供觀察指標，為未來開展臨床試驗及相關研究提供正常參考值。但本研究存在以下不足：（1）樣本量雖較目前已發表D-OCT相關研究樣本量大，但由于入組受試者均需散瞳等條件限制，對于結構厚度正常值研究仍顯不足；（2）未能縮小年齡間隔分層研究，如每10歲甚至5歲ONL厚度差異；（3）圖像標記可能出現誤差；（4）樣本均為國人，其結果可能不適用于其他人種；（5）年齡對ONL厚度的影響研究中，采用的橫斷面研究方法，需要進一步縱向研究結果加以證實。
Henle纖維層（HFL）為外叢狀層（OPL）的外側部分，包含光感受器軸突和Müller細胞的一部分，黃斑區分布較多[1]。傳統OCT圖像中外核層（ONL）和HFL邊界不清，由于受制于OCT技術水平，并沒有獨立的ONL與HFL厚度測量[2-3]。新型頻域OCT（SD-OCT）可以測量活體視網膜ONL厚度，并通過改變探測光的入射角度觀察到HFL。在此基礎上，逐漸形成方向OCT（D-OCT）的概念。D-OCT利用Henle纖維放射狀走行及雙折射反射特性，可清晰顯示中心凹兩側的HFL[4-7]。目前國內外已有應用D-OCT分析健康人群ONL厚度的研究，但僅限于小樣本且未系統觀察年齡、性別對ONL厚度的影響[5-9]。本研究應用D-OCT測量了一組正常人視網膜ONL厚度，分析其隨年齡、性別及解剖部位的變化規律。現將結果報道如下。
1 對象和方法
橫斷面觀察性研究。遵循赫爾辛基宣言。所有受試者均自愿接受該項目并簽署書面同意書。
2017年8月至2019年1月于北京同仁醫院眼科就診且經常規檢查受檢眼無異常者及健康志愿者納入本研究。隨機選取右眼或左眼入組。詳細采集受試者全身病史、家族史信息；均行BCVA、裂隙燈顯微鏡、間接檢眼鏡、屈光度、眼壓、SD-OCT檢查。
納入標準：（1）BCVA≥20/25；（2）眼壓≤21 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）；（3）眼前節及眼底檢查未見異常；（4）SD-OCT檢查顯示平均視網膜厚度正常；（5）OCT圖像信號強度≥7。排除標準：（1）近視或遠視屈光度＞3.00 D，散光度數＞2.00 D；（2）既往有青光眼、視網膜疾病等病史；（3）屈光間質混濁；（4）既往有眼部手術史；（5）有糖尿病、高血壓等全身疾病史。
采用美國Carl Zeiss公司Cirrus HD-OCT5000儀5線高清單線掃描模式對黃斑區進行水平、垂直掃描。受試眼復方托吡卡胺滴眼液散瞳，瞳孔直徑＞6 mm。操作方法參考威斯康辛醫學院機構審查委員會提供的D-OCT操作標準。掃描模式：HD5-lineRaster（調整間隔0 mm），掃描線長度6 mm。水平掃描：視標位于瞳孔中央、顳側、鼻側；垂直掃描：視標位于瞳孔中央、下方、上方。受試者保持固定頭位，注視機器內固視標，入射光從瞳孔中央進入掃描，使成像中的視網膜水平；調整入射光于顳側距瞳孔中央約1.5～2.0 mm，得到傾斜掃描圖像；調整入射光于鼻側距瞳孔中央約1.5～2.0 mm，再次掃描（圖1）。開啟追蹤模式，保證3次掃描均為同一位置，減少眼球微小運動產生的掃描誤差，得到有清晰HFL、ONL分界線的圖像。按照同樣方法進行垂直掃描。
圖1
瞳孔不同位置入射光HFL反射特征SD-OCT像。白色線圈代表瞳孔，黃點代表入射光進入位點。1A示入射光從瞳孔鼻側進入，顳側弱反射區域呈現部分強反射即HFL（黃箭），鼻側HFL未顯現；1B示入射光從瞳孔中央進入，可見OPL為一薄層強反射結構，ONL為較寬的弱反射結構，未見HFL及HFL與ONL邊界；1C示入射光從顳側進入，鼻側弱反射信號區域部分呈強反射即HFL（黃箭）
利用Photoshop CC2019軟件對采集的左眼水平掃描圖像做水平翻轉處理，使得左、右眼掃描線均為顳側至鼻側，便于后續圖像分析。基于Matlab開發自動測量軟件（北京大恒技術公司），同時載入從瞳孔中央、顳側及鼻側入射掃描黃斑區同一部位的3張圖像，將傾斜圖像調整為水平，行偽彩標記并疊加為1張顯示中心凹兩側各3 mm的圖像。圖像疊加以3張圖像的內界膜、RPE層重合為準[6]（圖2）。在HFL上界、下界及外界膜（ELM）手動分層，Matlab軟件分析得到每個標記點的像素坐標，并計算對應點的ONL以及ONL+HFL厚度值。以黃斑中心為圓心，直徑1.5 mm范圍為中心凹，1.5～2.5 mm為旁中心凹，2.5～5.5 mm為中心凹周圍區，比較直徑5.5 mm范圍黃斑區不同區域ONL厚度隨年齡、性別改變的變化規律。由兩名操作者分別對隨機選取的9名受試者的同一只眼進行圖像采集，其中一名操作者為經培訓后的有經驗者，另一名操作者為無培訓經驗者。按照D-OCT操作標準進行掃描，比較兩者操作的一致性。圖像處理由上述經過培訓的操作者進行，包括標記、分層、測量，每張圖像進行3次測量，取平均值，并且在1周內進行2次重復測量，檢測同一名操作者標記測量的可靠性[8, 10]。
采用SPSS 25.0軟件進行統計分析。各層組織厚度采用均數±標準差（）表示。利用Medcalc軟件進行Bland-Altman分析及計算組內相關系數（ICC）分析2名操作者測量的一致性及一名操作者對圖像標記測量的可靠性，ICC＞0.8為非常可靠[10-11]。年齡對ONL的影響行單因素方差分析；性別對ONL的影響行獨立樣本t檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。
2 結果
共入組67名67只眼。其中，男性27名27只眼，女性40名40只眼；右眼46只眼，左眼21只眼。年齡7～67歲，平均年齡為（39.97±16.98）歲。男性、女性平均年齡分別為（38.48±15.33）、（40.98±17.78）歲，差異無統計學意義（t=0.582，P=0.562）。年齡＜20、20～39、40～59、≥60歲者分別為11、22、22、12名，并據此分為A組、B組、C組、D組。Bland-Altman數據分析結果顯示，95%一致性界限（LOA）范圍較窄，且均值差異小（圖3）；ICC＞0.85。提示同一名操作者標記的重復性高；2名操作者掃描的一致性好。
圖3
差異對比均值Bland-Altman圖。3A、3B分別示不同操作者掃描的差異對比；3C、3D分別示同一名操作者圖像重復標記的差異對比。3A、3C和3B、3D圖中中央藍線分別代表中心凹ONL和ONL+HFL厚度差異均值；標記標出點代表每名受試者中心凹處ONL或ONL+HFL厚度；上下兩側紅色虛線表示LOA
2.1 解剖部位對ONL厚度的影響
水平掃描，隨離心率增大，ONL+HFL厚度先增大后降低。ONL+HFL厚度于鼻側和顳側距中心凹0.30 mm處最厚，分別為（112.42±12.17）、（112.10±11.30）μm；其后隨離心率增大，厚度逐漸降低（圖4A）。ONL厚度于中心凹最厚，為（88.66±13.62）μm；隨離心率增大，厚度逐漸降低，鼻側1.05 mm、顳側0.90 mm處分別為（33.68±6.65）、（34.05±6.02）μm。鼻側0.90 mm、顳側0.75 mm處ONL/ONL+HFL值最低，分別為36.1%、38.3%。
圖4
不同掃描方向ONL、ONL+HFL厚度變化。4A示水平掃描，T：顳側，N：鼻側；4B示垂直掃描，I：下方，S：上方
垂直掃描，隨離心率增大，ONL+HFL厚度先增大后降低。下方距中心凹0.15 mm、上方距中心凹0.30 mm處最厚，分別為（111.42±14.32）、（114.89±12.15）μm；其后隨離心率增大，厚度逐漸降低（圖4B）。ONL厚度于中心凹最厚，為（92.28±15.41）μm；其后隨離心率增大厚度逐漸降低，下方1.20 mm、上方1.05 mm處分別為（27.80±6.72）、（32.47±5.43）μm。下方0.75 mm、上方0.90 mm處ONL/ONL+HFL比值最小，分別為36.2%、35.6%。
2.2 年齡對ONL厚度的影響
不同年齡組受試者黃斑5.5 mm范圍中心凹及顳側旁中心凹ONL厚度比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；其余區域差異均有統計學意義（P＜0.05）。旁中心凹、中心凹周圍區4組間差值最大者分別為5.81、6.66 μm（表1）。
表1
不同年齡者組受試者黃斑5.5 mm范圍不同區域ONL厚度比較（μm, ）
2.3 性別對ONL厚度的影響
黃斑5.5 mm范圍不同區域，除下方中心凹周圍區外，男性ONL厚度均大于女性，中心凹差異無統計學意義（P＞0.05）；中心凹周圍區下方無統計學意義（P＞0.05），其他區域差異均有統計學意義（P＜0.05）（表2，圖5）。
表2
不同性別者黃斑5.5 mm范圍不同區域ONL厚度比較（μm, ）
圖5
不同性別者黃斑ONL厚度變化。5A示水平掃描， T：顳側，N：鼻側；5B示垂直掃描，I：下方，S：上方
3 討論
臨床上有多種眼底疾病與HFL關系密切，如黃斑囊樣水腫、中心性漿液性脈絡膜視網膜病變、老年性黃斑變性相關的地圖性萎縮、特發性黃斑裂孔等[12-13]。既往由于局限于傳統OCT技術水平及HFL獨特的排列方式，往往忽視HFL的存在或將正常HFL表現誤認為疾病的影像學特征[14]。D-OCT利用Henle纖維放射狀走行及雙折射反射特性，可清晰顯示中心凹兩側的HFL，能準確地對HFL及ONL進行定性及定量分析和定位病灶。Ouyang等[15]、翁銘等[9]分別觀察了D-OCT圖像上HFL正常形態和健康國人HFL的圖像特征。既往有學者觀察到OPL與ELM之間弱反射區域存在強反射，并認為是疾病所致ONL改變[14]。D-OCT掃描顯示該強反射區域為HFL[15]。因此，D-OCT可作為判定OPL與ELM之間病灶位置的一種可靠手段。另外，D-OCT還可用于定量分析ONL、HFL厚度，有助于觀察影響光感受器細胞疾病的進展及治療效果，判斷預后及治療終點。
本研究結果顯示，ONL厚度在距中心凹0.9～1.2 mm處最薄，水平徑線和垂直徑線上厚度存在差異，其原因可能與視錐、視桿細胞分布的空間差異性有關。Lujan等[6]研究發現，ONL在距中心凹0.8～1.0 mm處最薄，水平徑線和垂直徑線上厚度亦存在差異，本研究結果與此基本一致。本研究還發現，中心凹處ONL/ONL+HFL值最大，距中心凹0.75～0.90 mm處最小。Lujan等[6]發現上方、下方、鼻側、顳側距中心凹約0.75 mm處ONL/ONL+HFL值最小，約40%。這提示傳統標準OCT掃描所觀察到的“ONL”（實為ONL+HFL）厚度較真實ONL厚度誤差非常大。翁銘等[9]采用D-OCT掃描觀察了24名國人的HFL并分析其及ONL厚度，發現距中心凹0.75、1.50 mm處ONL厚度差異不明顯，各區域差值為2.87～8.23 μm。本研究較翁銘等[9]研究樣本量更大，受試眼均進行水平與垂直掃描，每條掃描線采集間隔為150 μm的40個點進行厚度分析，并且增加了年齡及性別分組研究，整體及個體研究均更全面。
本研究結果顯示，20～39歲者ONL厚度最厚，40～59歲者次之，＜20歲及≥60歲者厚度相近。Tong等[8]研究發現，較大年齡組受試者ONL厚度比年輕組厚，其差異中心凹較周邊更顯著，約為5.8～8.0 μm。但該研究樣本量小（按年齡分為2組，每組8人），年齡跨度大。Ooto等[16]認為ONL+OPL厚度并非隨年齡進展而變化。2017年，Nieves-Moreno等[17]納入297只眼，受試者年齡跨度18～87歲，結果顯示，OPL厚度隨年齡增加而增厚，ONL厚度隨年齡增加而變薄，約以每25年2.45 μm的速率變薄，但該項研究ONL為ONL+HFL，其結果仍有誤差。本研究結果與以上研究結果并非完全一致的原因可能是人種差異以及測量方法的不同。目前有關年齡與ONL厚度的研究均為橫斷面觀察，尚需進一步縱向研究結果加以證實。
本研究結果顯示，同一解剖位點男性ONL厚度較女性厚，旁中心凹及中心凹周圍區差異更顯著。Ooto等[16]研究發現，男性ONL+OPL厚度大于女性，但未單獨觀察ONL厚度變化。Won等[18]研究發現，女性平均ONL厚度較男性大，但ONL仍為ONL+HFL。Nieves-Moreno等[17]發現，與男性比較，女性ONL以及節細胞層、內叢狀層、內核層厚度更薄，該結果與本研究結果一致。
目前已有研究應用D-OCT分析部分眼底疾病中ONL厚度變化。Menghini等[19]應用D-OCT對正常人與視網膜色素變性患者ONL厚度進行比較，發現兩者ONL厚度差異無統計學意義。Lee等[20]應用D-OCT觀察白化病患者HFL及ONL厚度變化，發現白化病患者HFL較正常人偏厚，而ONL偏薄。
本研究為國內首次應用D-OCT對國人ONL厚度與解剖部位、性別、年齡變化的研究。為今后進一步探索影響ONL及HFL疾病如老年性黃斑變性、Stargardt病等病程進展及治療提供觀察指標，為未來開展臨床試驗及相關研究提供正常參考值。但本研究存在以下不足：（1）樣本量雖較目前已發表D-OCT相關研究樣本量大，但由于入組受試者均需散瞳等條件限制，對于結構厚度正常值研究仍顯不足；（2）未能縮小年齡間隔分層研究，如每10歲甚至5歲ONL厚度差異；（3）圖像標記可能出現誤差；（4）樣本均為國人，其結果可能不適用于其他人種；（5）年齡對ONL厚度的影響研究中，采用的橫斷面研究方法，需要進一步縱向研究結果加以證實。
