引用本文： 周琴, 楊向貴, 王丹, 范英子, 白婷婷, 許穎. 頭孢他啶/阿維巴坦對耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌的體外抗菌活性分析. 華西醫學, 2020, 35(8): 918-923. doi: 10.7507/1002-0179.202006368 復制
肺炎克雷伯菌是醫院感染最常見的條件致病菌，耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌（carbapenem-resistant Klebaiella pneumoniae，CRKP）因攜帶編碼碳青霉烯酶質粒而備受關注，產碳青霉烯酶是導致肺炎克雷伯菌對碳青霉烯類抗菌藥物耐藥的重要原因[1]。由于抗菌藥物的長期不規范使用，肺炎克雷伯菌對碳青酶烯類抗菌藥物的耐藥率逐年升高[2]。全國細菌耐藥監測網數據顯示，2016 年肺炎克雷伯菌對亞胺培南的耐藥率是 16.8%，CRKP 多表現為多重耐藥且致死率很高，給臨床抗感染治療帶來巨大挑戰[3]。阿維巴坦是一種新型 β-內酰胺酶抑制劑，能抑制 A 型［如肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶（Klebsiella pneumoniae carbapenemase，KPC）］、C 型和部分 D 型［如苯唑西林酶（oxacillin β-lactamase，OXA）-48］β-內酰胺酶，但對 B 型 β-內酰胺酶［如新德里金屬 β-內酰胺酶-1（New Delhi metallo-β-lactamase-1，NDM-1）］無效[4]。頭孢他啶/阿維巴坦作為新型抗菌藥物，對多重耐藥的革蘭陰性細菌（包括產 β-內酰胺酶的腸桿菌科細菌和銅綠假單胞菌）具有高效的殺菌活性，且患者依從性強，不良反應少，其療效與美羅培南、亞胺培南/西司他丁相當[5-7]，該藥于 2015 年 2 月 25 日由美國食品藥品監督管理局批準在美國上市，主要用于成人復雜性腹腔感染和復雜性尿路感染，也可用于無可選治療方案的泌尿系統感染（如腎盂腎炎）[8]。然而現階段，頭孢他啶/阿維巴坦在國內尚未上市，關于其耐藥研究報道較少。為此，本研究對頭孢他啶/阿維巴坦對 CRKP 的體外抗菌活性進行了分析。
1 資料與方法
1.1 菌株來源
收集 2014 年 5 月—2017 年 11 月成都醫學院第一附屬醫院臨床分離的非重復 CRKP 菌株 120 株。菌株鑒定及藥物敏感性（藥敏）試驗經 Vitek-2 Compact 全自動微生物鑒定藥敏分析儀進行，結果參照美國臨床與實驗室標準協會（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）2019 標準[9]進行判讀。質量控制（質控）菌株大腸埃希菌 ATCC 25922、肺炎克雷伯菌 ATCC 700603 均購自成都市衛生及計劃生育委員會臨床檢驗中心。本研究經成都醫學院第一附屬醫院醫學倫理委員會審查通過，批件號：2020CYFYHEC-BA-70。
1.2 儀器與試劑
主要儀器包括聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）擴增儀（美國 ABI 公司）、紫外凝膠成像系統（美國 Bio-Rad 公司）；主要試劑包括 DNA 聚合酶 rTaqDNA（日本 Takara 公司）、PCR 擴增引物（上海生物工程有限公司）、PCR 擴增產物純化及雙向測序（美國 Invitrogen 公司）。藥敏試驗藥物與試劑信息見表 1。
表1
藥敏試驗藥物與試劑信息
1.3 藥敏試驗
采用微量肉湯稀釋法測定 11 種抗菌藥物即替加環素、米諾環素、美洛培南、亞胺培南、頭孢他啶、頭孢噻肟、頭孢哌酮/舒巴坦、頭孢他啶/阿維巴坦、氨曲南、阿米卡星、左氧氟沙星的最小抑菌濃度（minimum inhibitory concentration，MIC），抗菌藥物的配制見表 2，試驗方法和檢測結果評估標準[9-10]參照見表 3。
表2
抗菌藥物儲備液制備
表3
CRKP 對 11 種抗菌藥物的敏感性及質控范圍判定依據
1.4 耐藥基因檢測
選取對數期生長的細菌懸液 100 μL，95℃ 加熱 10 min，10 000×g 離心 10 min，收集上清液分裝，于–20℃ 保存用于 PCR 的模板。采用 PCR 檢測常見碳青霉烯耐藥基因，擴增條件：95℃ 預變性 5 min；95℃ 變性 45 s，60℃ 退火 45 s，72℃ 延伸 1 min，共 35 個循環；最后 72℃ 延伸 8 min。引物濃度均為 0.3 μmol/L，所有擴增出的序列純化與測序由美國 Invitrogen 公司完成，同時將檢測結果在美國國立生物技術信息中心網站上采用基本局部比對搜索工具（basic local alignment search tool，BLAST）進行比對，耐藥基因引物序列見表 4。
表4
耐藥基因引物序列
1.5 統計學方法
應用 SPSS 20.0 軟件進行統計分析。計數資料采用株數和/或百分比進行描述；同一組菌株對多種抗菌藥物耐藥率的比較采用 Cochran Q 檢驗，有統計學意義則進一步進行多重比較。雙側檢驗水準 α=0.05。
2 結果
2.1 120 株 CRKP 菌株來源分布
120 株 CRKP 菌株分離于 10 種臨床標本，分別是尿液（22 株，占 18.33%）、痰/吸痰（19 株，占 15.83%）、分泌物（17 株，占 14.17%）、灌洗液（14 株，占 11.67%）、腹水（11 株，占 9.17%）、肛拭子（10 株，占 8.33%）、胸水（9 株，占 7.50%）、血液（7 株，占 5.83%）、鼻拭子（7 株，占 5.83%）、腦脊液（4 株，占 3.33%）。
2.2 120 株 CRKP 菌株對 11 種抗菌藥物的藥敏試驗結果
120 株 CRKP 菌株對 11 種抗菌藥物藥敏試驗結果顯示，耐藥率最高的是頭孢噻肟（120 株，100.00%），其次是氨曲南（118 株，98.33%）、頭孢他啶（115 株，95.83%）、頭孢哌酮/舒巴坦（115 株，95.83%）、美洛培南（115 株，95.83%）、亞胺培南（114 株，95.00%），耐藥率較低的是頭孢他啶/阿維巴坦（20 株，16.67%）、替加環素（28 株，23.33%）、米諾環素（47 株，39.17%）。Cochran Q 檢驗結果顯示，120 株 CRKP 菌株對 11 種抗菌藥物耐藥率差異有統計學意義（Q=709.056，P<0.001）；多重比較結果顯示，頭孢他啶/阿維巴坦的耐藥率與其他 10 種抗菌藥物比較，差異均有統計學意義（P<0.001），頭孢他啶/阿維巴坦耐藥率最低。見表 5。
表5
120 株 CRKP 菌株對 11 種抗菌藥物的藥敏試驗結果［株（%）］
2.3 20 株耐頭孢他啶/阿維巴坦 CRKP 菌株對 10 種抗菌藥物的藥敏試驗結果
20 株耐頭孢他啶/阿維巴坦的 CRKP 菌株對 10 種抗菌藥物的藥敏試驗結果顯示，耐藥率最高的是米諾環素（20 株，100%）、頭孢他啶（20 株，100%）、頭孢噻肟（20 株，100%）、頭孢哌酮/舒巴坦（20 株，100%），其次是美洛培南（19 株，95%）、亞胺培南（19 株，95%）、氨曲南（19 株，95%），耐藥率相對較低的是阿米卡星（8 株，40%）和替加環素（14 株，70%）。見表 6。
表6
20 株耐頭孢他啶/阿維巴坦 CRKP 菌株對 10 種抗菌藥物的藥敏試驗結果［株（%）］
2.4 20 株耐頭孢他啶/阿維巴坦 CRKP 菌株的常見耐藥基因分析
PCR 檢測結果顯示，在 20 株耐頭孢他啶/阿維巴坦 CRKP 菌株中，產 KPC-2 酶 12 株（60%），產 KPC-3 酶 3 株（15%），產 NDM-1 酶 1 株（5%），產 OXA-48 酶 1 株（5%），未檢測到產酶 3 株（15%）。通過測序及 BLAST 比對，未發現 KPC-2、KPC-3 的突變株。
3 討論
β-內酰胺酶抑制劑作為一種 β-內酰胺藥物在臨床上的使用越來越廣泛，傳統的 β-內酰胺酶抑制劑包括克拉維酸、舒巴坦和他唑巴坦，它們均屬于 β-內酰胺類化合物，主要抑制 A 類 β-內酰胺酶，對 B、C、D 類 β-內酰酶胺無抑制作用或抑制作用較弱[11-12]。傳統的 β-內酰胺酶抑制劑的主要作用機制為 β-內酰胺酶抑制劑和 β-內酰胺酶結合形成 Michaelis 復合體，在與 β-內酰胺酶結合的過程中，β-內酰胺抑制劑結構也被破壞，失去活性，所以傳統的 β-內酰胺酶抑制劑被稱為自殺型抑制[12]。阿維巴坦是一種新型 β-內酰胺酶抑制劑，具有較高的分子活性，可以抑制 A 類、C 類和某些 D 類酶，阿維巴坦與傳統的 β-內酰胺酶的本質區別在于，β-內酰胺酶活性部位絲氨酸與阿維巴坦以酰胺鍵共價結合形成復合體，在此過程中阿維巴坦不會發生水解，再經環合形成內酰胺環后，阿維巴坦又可以恢復活性[13-14]，更重要的是，相對于傳統的 β-內酰胺酶抑制劑，阿維巴坦不會誘導 β-內酰胺酶產生[15-16]，并且研究發現，1～5 個阿維巴坦分子就可以抑制一個 β-內酰胺酶分子，而傳統的 β-內酰胺酶抑制劑則需要 55～214 個分子，因此阿維巴坦具有更強的抑菌作用[17]。
臨床研究表明，阿維巴坦能明顯改善頭孢他啶的抗菌活性[12]，在治療復雜尿路感染及復雜腹腔感染中，頭孢他啶/阿維巴坦（聯合甲硝唑）與美羅培南或亞胺培南/西司他丁療效相當，且頭孢他啶/阿維巴坦藥物代謝動力學更穩定，耐受性更強，與藥物有關的不良反應少[15]。本研究結果顯示，在 120 株 CRKP 菌株中，95 株對頭孢他啶/阿維巴坦敏感，敏感率高達 79.17%，明顯高于目前常用的抗菌藥物如替加環素（76.67%）、米諾環素（45.83%）、阿米卡星（43.37%）。
隨著臨床廣譜抗菌藥物的普及應用，細菌耐藥性問題日益嚴峻，給臨床抗感染治療帶來巨大挑戰。耐碳青霉烯類腸桿菌科細菌（carbapenem resistant Enterobacteriaceae，CRE）感染性疾病已成為全球共同面對的最棘手的醫療問題[18-19]。美國多項研究發現產 KPC 酶突變型的肺炎克雷伯菌對頭孢他啶/阿維巴坦出現耐藥情況[16]。國內姚志宏等[17]、黃秋艷等[20]的研究發現，我國 CRE 菌株以產 KPC-2 酶為主。楊春[21]對 CRE 的耐藥機制進行研究，結果表明，12 株 CRE 對青霉素類、頭孢菌素類、β-內酰胺類藥物的耐藥率較高。本研究結果顯示，在 120 株 CRKP 菌株中，有 20 株對頭孢他啶/阿維巴坦耐藥，耐藥率為 16.67%。再對 20 株耐頭孢他啶/阿維巴坦 CRKP 進行酶學分析發現，有 15 株產 KPC 酶（12 株產 KPC-2 酶，3 產 KPC-3 酶，且均無突變株），1 株產 OXA-48 酶，1 株產 NDM-1 酶，其他 3 株未發現產 β-內酰胺酶。KPC 酶屬于一種碳青霉烯酶，克拉維酸鉀可抑制其部分活性，國內研究發現 KPC-2 酶在腸桿菌科細菌中最為流行[22-23]。NDM-1 酶屬于一種新型金屬酶，雖其與已知的金屬酶序列相似性不高，但可水解除氨曲南外的幾乎所有 β-內酰胺類抗菌藥物[24]。OXA-48 酶是一類 D 類碳青霉烯酶，最早于 2003 年在土耳其被發現，在鮑曼不動桿菌中最為常見[25-26]。
有研究報道，在 CRE 菌株中，頭孢他啶/阿維巴坦抗菌活性明顯高于碳青霉烯類和頭孢菌素類抗菌藥物[27]。本研究納入的 120 株 CRKP 對頭孢他啶/阿維巴坦的耐藥率為 16.67%，顯著低于對頭孢噻肟、氨曲南、頭孢他啶、頭孢哌酮/舒巴坦、美洛培南、亞胺培南耐藥率。王琴等[28]指出，在耐頭孢他啶/阿維巴坦的 CRE 菌株中，耐藥基因以 KPC-2 型為主，其次為 KPC-3、NDM-1 和 OXA-48 等。在本研究中我們通過 PCR 檢測 20 株耐頭孢他啶/阿維巴坦的菌株中產 KPC 酶的 CRKP 共 15 株（占 75%），產 OXA-48 酶 1 株（占 5%），產 NDM-1 酶 1 株（占 5%），所有的 KPC 酶型中均無突變型。
綜上所述，頭孢他啶/阿維巴坦對 CRKP 菌株具有較好的體外抑菌活性，且抗菌活性明顯優于頭孢菌素類、碳青霉烯類和氨基糖苷類等臨床常用抗菌藥物，因此頭孢他啶/阿維巴坦具有較好的應用前景。
肺炎克雷伯菌是醫院感染最常見的條件致病菌，耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌（carbapenem-resistant Klebaiella pneumoniae，CRKP）因攜帶編碼碳青霉烯酶質粒而備受關注，產碳青霉烯酶是導致肺炎克雷伯菌對碳青霉烯類抗菌藥物耐藥的重要原因[1]。由于抗菌藥物的長期不規范使用，肺炎克雷伯菌對碳青酶烯類抗菌藥物的耐藥率逐年升高[2]。全國細菌耐藥監測網數據顯示，2016 年肺炎克雷伯菌對亞胺培南的耐藥率是 16.8%，CRKP 多表現為多重耐藥且致死率很高，給臨床抗感染治療帶來巨大挑戰[3]。阿維巴坦是一種新型 β-內酰胺酶抑制劑，能抑制 A 型［如肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶（Klebsiella pneumoniae carbapenemase，KPC）］、C 型和部分 D 型［如苯唑西林酶（oxacillin β-lactamase，OXA）-48］β-內酰胺酶，但對 B 型 β-內酰胺酶［如新德里金屬 β-內酰胺酶-1（New Delhi metallo-β-lactamase-1，NDM-1）］無效[4]。頭孢他啶/阿維巴坦作為新型抗菌藥物，對多重耐藥的革蘭陰性細菌（包括產 β-內酰胺酶的腸桿菌科細菌和銅綠假單胞菌）具有高效的殺菌活性，且患者依從性強，不良反應少，其療效與美羅培南、亞胺培南/西司他丁相當[5-7]，該藥于 2015 年 2 月 25 日由美國食品藥品監督管理局批準在美國上市，主要用于成人復雜性腹腔感染和復雜性尿路感染，也可用于無可選治療方案的泌尿系統感染（如腎盂腎炎）[8]。然而現階段，頭孢他啶/阿維巴坦在國內尚未上市，關于其耐藥研究報道較少。為此，本研究對頭孢他啶/阿維巴坦對 CRKP 的體外抗菌活性進行了分析。
1 資料與方法
1.1 菌株來源
收集 2014 年 5 月—2017 年 11 月成都醫學院第一附屬醫院臨床分離的非重復 CRKP 菌株 120 株。菌株鑒定及藥物敏感性（藥敏）試驗經 Vitek-2 Compact 全自動微生物鑒定藥敏分析儀進行，結果參照美國臨床與實驗室標準協會（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）2019 標準[9]進行判讀。質量控制（質控）菌株大腸埃希菌 ATCC 25922、肺炎克雷伯菌 ATCC 700603 均購自成都市衛生及計劃生育委員會臨床檢驗中心。本研究經成都醫學院第一附屬醫院醫學倫理委員會審查通過，批件號：2020CYFYHEC-BA-70。
1.2 儀器與試劑
主要儀器包括聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）擴增儀（美國 ABI 公司）、紫外凝膠成像系統（美國 Bio-Rad 公司）；主要試劑包括 DNA 聚合酶 rTaqDNA（日本 Takara 公司）、PCR 擴增引物（上海生物工程有限公司）、PCR 擴增產物純化及雙向測序（美國 Invitrogen 公司）。藥敏試驗藥物與試劑信息見表 1。
表1
藥敏試驗藥物與試劑信息
1.3 藥敏試驗
采用微量肉湯稀釋法測定 11 種抗菌藥物即替加環素、米諾環素、美洛培南、亞胺培南、頭孢他啶、頭孢噻肟、頭孢哌酮/舒巴坦、頭孢他啶/阿維巴坦、氨曲南、阿米卡星、左氧氟沙星的最小抑菌濃度（minimum inhibitory concentration，MIC），抗菌藥物的配制見表 2，試驗方法和檢測結果評估標準[9-10]參照見表 3。
表2
抗菌藥物儲備液制備
表3
CRKP 對 11 種抗菌藥物的敏感性及質控范圍判定依據
1.4 耐藥基因檢測
選取對數期生長的細菌懸液 100 μL，95℃ 加熱 10 min，10 000×g 離心 10 min，收集上清液分裝，于–20℃ 保存用于 PCR 的模板。采用 PCR 檢測常見碳青霉烯耐藥基因，擴增條件：95℃ 預變性 5 min；95℃ 變性 45 s，60℃ 退火 45 s，72℃ 延伸 1 min，共 35 個循環；最后 72℃ 延伸 8 min。引物濃度均為 0.3 μmol/L，所有擴增出的序列純化與測序由美國 Invitrogen 公司完成，同時將檢測結果在美國國立生物技術信息中心網站上采用基本局部比對搜索工具（basic local alignment search tool，BLAST）進行比對，耐藥基因引物序列見表 4。
表4
耐藥基因引物序列
1.5 統計學方法
應用 SPSS 20.0 軟件進行統計分析。計數資料采用株數和/或百分比進行描述；同一組菌株對多種抗菌藥物耐藥率的比較采用 Cochran Q 檢驗，有統計學意義則進一步進行多重比較。雙側檢驗水準 α=0.05。
2 結果
2.1 120 株 CRKP 菌株來源分布
120 株 CRKP 菌株分離于 10 種臨床標本，分別是尿液（22 株，占 18.33%）、痰/吸痰（19 株，占 15.83%）、分泌物（17 株，占 14.17%）、灌洗液（14 株，占 11.67%）、腹水（11 株，占 9.17%）、肛拭子（10 株，占 8.33%）、胸水（9 株，占 7.50%）、血液（7 株，占 5.83%）、鼻拭子（7 株，占 5.83%）、腦脊液（4 株，占 3.33%）。
2.2 120 株 CRKP 菌株對 11 種抗菌藥物的藥敏試驗結果
120 株 CRKP 菌株對 11 種抗菌藥物藥敏試驗結果顯示，耐藥率最高的是頭孢噻肟（120 株，100.00%），其次是氨曲南（118 株，98.33%）、頭孢他啶（115 株，95.83%）、頭孢哌酮/舒巴坦（115 株，95.83%）、美洛培南（115 株，95.83%）、亞胺培南（114 株，95.00%），耐藥率較低的是頭孢他啶/阿維巴坦（20 株，16.67%）、替加環素（28 株，23.33%）、米諾環素（47 株，39.17%）。Cochran Q 檢驗結果顯示，120 株 CRKP 菌株對 11 種抗菌藥物耐藥率差異有統計學意義（Q=709.056，P<0.001）；多重比較結果顯示，頭孢他啶/阿維巴坦的耐藥率與其他 10 種抗菌藥物比較，差異均有統計學意義（P<0.001），頭孢他啶/阿維巴坦耐藥率最低。見表 5。
表5
120 株 CRKP 菌株對 11 種抗菌藥物的藥敏試驗結果［株（%）］
2.3 20 株耐頭孢他啶/阿維巴坦 CRKP 菌株對 10 種抗菌藥物的藥敏試驗結果
20 株耐頭孢他啶/阿維巴坦的 CRKP 菌株對 10 種抗菌藥物的藥敏試驗結果顯示，耐藥率最高的是米諾環素（20 株，100%）、頭孢他啶（20 株，100%）、頭孢噻肟（20 株，100%）、頭孢哌酮/舒巴坦（20 株，100%），其次是美洛培南（19 株，95%）、亞胺培南（19 株，95%）、氨曲南（19 株，95%），耐藥率相對較低的是阿米卡星（8 株，40%）和替加環素（14 株，70%）。見表 6。
表6
20 株耐頭孢他啶/阿維巴坦 CRKP 菌株對 10 種抗菌藥物的藥敏試驗結果［株（%）］
2.4 20 株耐頭孢他啶/阿維巴坦 CRKP 菌株的常見耐藥基因分析
PCR 檢測結果顯示，在 20 株耐頭孢他啶/阿維巴坦 CRKP 菌株中，產 KPC-2 酶 12 株（60%），產 KPC-3 酶 3 株（15%），產 NDM-1 酶 1 株（5%），產 OXA-48 酶 1 株（5%），未檢測到產酶 3 株（15%）。通過測序及 BLAST 比對，未發現 KPC-2、KPC-3 的突變株。
3 討論
β-內酰胺酶抑制劑作為一種 β-內酰胺藥物在臨床上的使用越來越廣泛，傳統的 β-內酰胺酶抑制劑包括克拉維酸、舒巴坦和他唑巴坦，它們均屬于 β-內酰胺類化合物，主要抑制 A 類 β-內酰胺酶，對 B、C、D 類 β-內酰酶胺無抑制作用或抑制作用較弱[11-12]。傳統的 β-內酰胺酶抑制劑的主要作用機制為 β-內酰胺酶抑制劑和 β-內酰胺酶結合形成 Michaelis 復合體，在與 β-內酰胺酶結合的過程中，β-內酰胺抑制劑結構也被破壞，失去活性，所以傳統的 β-內酰胺酶抑制劑被稱為自殺型抑制[12]。阿維巴坦是一種新型 β-內酰胺酶抑制劑，具有較高的分子活性，可以抑制 A 類、C 類和某些 D 類酶，阿維巴坦與傳統的 β-內酰胺酶的本質區別在于，β-內酰胺酶活性部位絲氨酸與阿維巴坦以酰胺鍵共價結合形成復合體，在此過程中阿維巴坦不會發生水解，再經環合形成內酰胺環后，阿維巴坦又可以恢復活性[13-14]，更重要的是，相對于傳統的 β-內酰胺酶抑制劑，阿維巴坦不會誘導 β-內酰胺酶產生[15-16]，并且研究發現，1～5 個阿維巴坦分子就可以抑制一個 β-內酰胺酶分子，而傳統的 β-內酰胺酶抑制劑則需要 55～214 個分子，因此阿維巴坦具有更強的抑菌作用[17]。
臨床研究表明，阿維巴坦能明顯改善頭孢他啶的抗菌活性[12]，在治療復雜尿路感染及復雜腹腔感染中，頭孢他啶/阿維巴坦（聯合甲硝唑）與美羅培南或亞胺培南/西司他丁療效相當，且頭孢他啶/阿維巴坦藥物代謝動力學更穩定，耐受性更強，與藥物有關的不良反應少[15]。本研究結果顯示，在 120 株 CRKP 菌株中，95 株對頭孢他啶/阿維巴坦敏感，敏感率高達 79.17%，明顯高于目前常用的抗菌藥物如替加環素（76.67%）、米諾環素（45.83%）、阿米卡星（43.37%）。
隨著臨床廣譜抗菌藥物的普及應用，細菌耐藥性問題日益嚴峻，給臨床抗感染治療帶來巨大挑戰。耐碳青霉烯類腸桿菌科細菌（carbapenem resistant Enterobacteriaceae，CRE）感染性疾病已成為全球共同面對的最棘手的醫療問題[18-19]。美國多項研究發現產 KPC 酶突變型的肺炎克雷伯菌對頭孢他啶/阿維巴坦出現耐藥情況[16]。國內姚志宏等[17]、黃秋艷等[20]的研究發現，我國 CRE 菌株以產 KPC-2 酶為主。楊春[21]對 CRE 的耐藥機制進行研究，結果表明，12 株 CRE 對青霉素類、頭孢菌素類、β-內酰胺類藥物的耐藥率較高。本研究結果顯示，在 120 株 CRKP 菌株中，有 20 株對頭孢他啶/阿維巴坦耐藥，耐藥率為 16.67%。再對 20 株耐頭孢他啶/阿維巴坦 CRKP 進行酶學分析發現，有 15 株產 KPC 酶（12 株產 KPC-2 酶，3 產 KPC-3 酶，且均無突變株），1 株產 OXA-48 酶，1 株產 NDM-1 酶，其他 3 株未發現產 β-內酰胺酶。KPC 酶屬于一種碳青霉烯酶，克拉維酸鉀可抑制其部分活性，國內研究發現 KPC-2 酶在腸桿菌科細菌中最為流行[22-23]。NDM-1 酶屬于一種新型金屬酶，雖其與已知的金屬酶序列相似性不高，但可水解除氨曲南外的幾乎所有 β-內酰胺類抗菌藥物[24]。OXA-48 酶是一類 D 類碳青霉烯酶，最早于 2003 年在土耳其被發現，在鮑曼不動桿菌中最為常見[25-26]。
有研究報道，在 CRE 菌株中，頭孢他啶/阿維巴坦抗菌活性明顯高于碳青霉烯類和頭孢菌素類抗菌藥物[27]。本研究納入的 120 株 CRKP 對頭孢他啶/阿維巴坦的耐藥率為 16.67%，顯著低于對頭孢噻肟、氨曲南、頭孢他啶、頭孢哌酮/舒巴坦、美洛培南、亞胺培南耐藥率。王琴等[28]指出，在耐頭孢他啶/阿維巴坦的 CRE 菌株中，耐藥基因以 KPC-2 型為主，其次為 KPC-3、NDM-1 和 OXA-48 等。在本研究中我們通過 PCR 檢測 20 株耐頭孢他啶/阿維巴坦的菌株中產 KPC 酶的 CRKP 共 15 株（占 75%），產 OXA-48 酶 1 株（占 5%），產 NDM-1 酶 1 株（占 5%），所有的 KPC 酶型中均無突變型。
綜上所述，頭孢他啶/阿維巴坦對 CRKP 菌株具有較好的體外抑菌活性，且抗菌活性明顯優于頭孢菌素類、碳青霉烯類和氨基糖苷類等臨床常用抗菌藥物，因此頭孢他啶/阿維巴坦具有較好的應用前景。
