人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）感染急性期患者病毒載量高，傳播能力強，是HIV感染的重要傳染源。絕大部分急性感染期患者沒有或僅有輕微的臨床癥狀，其篩查和診斷往往依賴于實驗室檢測，但由于檢測存在窗口期，HIV感染的早期篩查和診斷存在一定困難。近年來，針對HIV感染急性期的實驗室檢測取得了較大的進步。該文對HIV感染急性期的實驗室檢測進展進行綜述，以期為后續的相關研究提供參考。
引用本文： 楊文娟, 魏垠昊, 魏彬, 陶傳敏. 人類免疫缺陷病毒感染急性期的實驗室檢測進展. 華西醫學, 2022, 37(1): 135-139. doi: 10.7507/1002-0179.202104267 復制
人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）感染引起的獲得性免疫缺陷綜合征（acquired immunodeficiency syndrome，AIDS）簡稱艾滋病，是全球重大衛生問題之一。截至2020年10月底，我國報告的現存活HIV/AIDS患者104.5萬例，當年新增HIV感染者11.2萬例[1]。目前我國HIV疫情整體處于低流行狀態，但西南地區流行率相對較高[2]。HIV感染急性期（acute HIV infection，AHI）患者體內病毒載量高，導致傳播風險高，如果能及時發現HIV感染并開展高效抗反轉錄病毒治療以降低病毒載量，能有效減少傳播[3]。然而，現有檢測技術和診斷水平并不能完全發現AHI患者并對其及時采取干預措施，這可能是目前HIV流行率居高不下的主要原因[4]。盡管每個HIV/AIDS患者均會經歷急性期，但由于大多數AHI患者沒有明顯臨床癥狀或癥狀輕微且缺乏特異性，加之試劑檢測窗口期等影響，很少能夠準確及時地診斷HIV急性感染[4-5]。近年來，檢測技術的進展縮短了HIV檢測窗口期，提高了HIV急性感染的診斷能力，本文對HIV急性感染的實驗室檢測進展進行綜述，旨在為后續研究提供參考。
1 AHI的定義
中國艾滋病診療指南（2018年版）中AHI的診斷標準是患者半年內有流行病學史或急性HIV感染綜合征，HIV抗體篩查試驗陽性和HIV補充試驗陽性[6]。歐洲臨床艾滋病學會指南（2021版）中將AHI定義為從檢測出HIV RNA和/或p24抗原到檢測出HIV抗體之間的時期，而將從血漿中HIV抗體開始轉陽到感染后6個月定義為近期感染，AHI和近期感染合稱為原發性HIV感染[7]。美國衛生與公眾服務部2021年更新的成人和青少年HIV患者抗反轉錄藥物使用指南中把AHI定義為血漿或血清中可檢測出HIV RNA或p24抗原且HIV抗體檢測結果陰性或不確定[8]。Yerly等[5]將AHI解釋為急性HIV感染綜合征加上實驗室檢測出免疫學特征和/或病毒學特征。基于這種想法，Fiebig等[9]根據HIV-1 RNA、HIV-1 p24抗原、免疫球蛋白M抗體、免疫球蛋白G抗體以及p31抗體出現時間，將原發性HIV感染分為6期，其中Ⅰ～Ⅴ期即為AHI，這一定義被廣泛認可。隨著第4代HIV抗原抗體聯合檢測試劑的應用，Ananworanich等[10]根據HIV-1 RNA、第4代HIV抗原抗體聯合檢測試劑、第3代HIV抗體檢測試劑等結果，對AHI再次進行分期，這種方法適合在實驗室使用。因此，目前AHI公認的定義是從檢測出HIV-1 RNA或p24抗原到檢測出HIV抗體之間的時間，但其受檢測試劑靈敏度影響。
2 AHI的傳播風險
在AHI階段，病毒在體內高水平復制，呈現一過性的高病毒血癥狀態，且生殖道分泌物和血液中的病毒載量均高，導致傳播風險高[11-12]。Quinn等[13]的研究表明，AHI患者血液中病毒載量每增加10倍，傳播風險增加2.5倍。Miller等[14]的研究顯示，原發性HIV感染通過性傳播的感染率比無癥狀期高26倍。Powers等[15]和Bellan等[16]的研究表明，10%～50%的HIV傳播來源于AHI患者等早期感染者。及時準確地診斷AHI并盡早進行高效抗反轉錄病毒治療，將患者體內的病毒載量降低至200拷貝/mL以下，能有效減少傳播風險，從而阻斷HIV在人群中的進一步流行[8]。
3 AHI的臨床表現
AHI的臨床癥狀缺乏特異性，主要表現為急性HIV感染綜合征，即初次感染HIV的1個月內出現發熱、咽痛、皮疹、肌肉關節痛、淋巴結腫大、頭痛、腹瀉、惡心、嘔吐等一系列臨床表現[6, 17]。快速進展者可能出現嚴重感染或者中樞神經系統癥狀體征及疾病[6]。值得注意的是，AHI患者早期通常無明顯臨床癥狀，可能導致漏診。Robb等[4]的前瞻性研究顯示，71%的AHI患者在感染早期無臨床癥狀，而50%的AHI患者在早期既無臨床癥狀，也沒有相應體征。此外，感染者在AHI階段所表現出的癥狀數量和嚴重程度與感染之后體內病毒峰值水平以及病毒調定點水平有明顯的相關性[18-19]。因此，AHI的相關臨床表現也可以作為患者感染后體內病毒水平的參考，并與其他實驗室檢測指標及患者的高危行為史等結合，用于判斷患者是否有AHI。
4 AHI的實驗室檢測
由于臨床癥狀缺乏特異性，AHI的篩查和診斷非常依賴于實驗室檢測。HIV感染依次出現的實驗室指標分別為HIV-1 RNA、HIV-1 p24抗原和HIV抗體。HIV-1 RNA和HIV-1 p24抗原是血漿中循環病毒顆粒的組成部分，在HIV抗體出現前即可檢測出，因此HIV核酸檢測、HIV抗原檢測和HIV抗原抗體聯合檢測在AHI的發現和診斷上具有重要的意義。
4.1 HIV核酸檢測
HIV-1 RNA在HIV感染后第10～12天可用聚合酶鏈反應或其他核酸擴增技術檢測出，是首個出現的病毒標志物[7, 18]。目前，HIV-1 RNA檢測主要在條件較好的實驗室開展，靈敏度可達100%，特異度約為90%，但有時會有2%～5%的假陽性結果[19]。
根據全國艾滋病檢測技術規范（2020修訂版），補充試驗包括HIV抗體確證試驗和HIV-1核酸試驗[20]。因為對HIV感染者的檢測存在窗口期，部分AHI患者HIV抗體確證試驗結果為陰性或不確定，核酸試驗成為AHI最常用有效的補充試驗。HIV核酸試驗包括核酸定性試驗和核酸定量試驗，全球目前正式用于臨床診斷HIV-1急性期感染的核酸定性檢測試劑較少，主要為美國食品藥品監督管理局批準的Gen-Probe公司生產的Aptima HIV-1 RNA核酸定性檢測試劑和歐洲聯盟批準的Abbott M2000 HIV-1 RNA/DNA定性檢測試劑。我國臨床實驗室主要應用的是HIV-1核酸定量檢測，常見試劑品牌有羅氏、達安基因、珠海麗珠、NEPG等[21-22]。盡管定量試劑存在假陽性的可能，但假陽性檢測結果通常比真正的AHI患者的病毒載量低很多，因此對于核酸定量試劑檢測低值（<5000拷貝/mL）的患者，應重新采樣檢測[17]。HIV核酸定量檢測>5000拷貝/mL與HIV核酸定性檢測陽性均已被中國艾滋病診療指南（2018年版）以及艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標準（WS293-2019）納入補充試驗陽性標準，HIV抗體初篩陽性且補充試驗陽性者可診斷HIV感染[6, 17]。
除臨床實驗室常用的實時熒光定量反轉錄聚合酶鏈反應外，核酸快速檢測試劑例如AlereTM q HIV-1/2 Detect試劑、AptimaTM HIV-1 Quant Dx Assay試劑、Xpert? HIV-1 Qual Assay試劑等已取得世界衛生組織的資格預審[23]，這些試劑的推廣將有助于AHI患者的早期自檢和偏遠地區的HIV檢測。
4.2 HIV抗原檢測
4.2.1 針對p24抗原的現有檢測
在HIV-1 RNA檢出后3～8 d可檢測到第2個AHI標志物HIV-1 p24抗原，相對于HIV-1 RNA，p24抗原常用的檢測方法（酶聯免疫吸附試驗、電化學發光法、酶聯熒光分析法等）更加快速、廉價，因此p24抗原通常被用于AHI等早期感染者的初步篩查[9, 20, 24]。但隨著HIV感染病程的進展，患者體內產生特異性p24抗體，與p24抗原形成抗原抗體復合物，導致患者血清中的p24抗原逐漸消失；到病程晚期，由于HIV/AIDS患者體內免疫系統遭到嚴重破壞，無法產生足量的p24抗體，p24抗原才在感染者血清中再次被檢出。由于HIV-1 p24抗原只在HIV感染初期和病程晚期可出現，難以單獨用于HIV的篩查，基于p24抗原的HIV初篩試劑通常會聯合檢測HIV抗體，即第4代HIV抗原抗體聯合檢測[20]。
4.2.2 檢測新進展
HIV-1 tat蛋白是HIV-1在感染早期即可大量產生的一種調節蛋白，tat蛋白可被釋放至宿主細胞外并在血清中被檢出，近年來被認為有望成為新的AHI實驗室檢測標志物[25]。研究者們已經研發了tat蛋白的許多檢測方法，包括傳統的酶聯免疫吸附試驗、免疫印跡法等基于抗原抗體反應的檢測[24]，也包括基于適配體的新型檢測方法[26]。然而，相比已經在臨床實驗室中廣泛使用的p24抗原，tat蛋白在AHI檢測中的效能以及相應檢測方法在臨床實驗室中的可行性仍有待進一步研究進行評價。
核酸適配體是一種單鏈DNA或RNA，適配體可以形成特定的二級或三級結構，從而使其高度特異性結合一系列靶物質（包括多肽、蛋白、細菌、細胞等），因此也被稱為“人造抗體”[27]。適配體具備高度化學穩定性和結合親合力、方便化學修飾、廉價的特點，因此基于適配體的生物標志物檢測技術已經被廣泛研究[27]。利用指數級富集配體系統進化技術，研究者們篩選出許多靶向HIV的適配體，例如詹少兵等[28]篩選出靶向HIV-1 p24抗原的適配體；Yamamoto等[29]篩選出靶向HIV tat蛋白的適配體；Caglayan等[26]利用適配體和橢圓偏振光譜建立高靈敏度的HIV-1 tat蛋白檢測新方法。
此外，近年來還出現了許多不依賴于適配體的HIV抗原檢測新方法，例如Liu等[30]利用微流控芯片建立HIV-1 p24抗原的可視化半定量檢測；Zhan等[31]基于金納米粒子的側流免疫分析建立HIV-1 p24抗原的即時檢驗方法。這些方法若能實現轉化并應用于臨床將有助于改善AHI的實驗室檢測。
4.3 HIV抗原抗體聯合檢測
目前的第4代HIV抗原抗體聯合檢測技術能夠替代單純HIV-1 p24抗原檢測，在臨床上已經被廣泛使用。第4代HIV抗原抗體聯合檢測的窗口期為13～25 d，優于第3代HIV抗體檢測（18～29 d）[18, 32]，對于無癥狀期HIV感染的靈敏度可達99.7%～100%，特異度可達99%～100%[32-33]，對于免疫印跡試驗陰性而HIV-1 RNA陽性的AHI的檢測靈敏度可達54%～83%[33-34]。Zhang等[35]研究發現47例第4代抗原抗體聯合檢測陽性的AHI患者中，22.7%的患者第3代抗體檢測結果為陰性，提示第4代試劑可顯著減少AHI的漏檢。此外，第4代HIV抗原抗體聯合檢測試劑可分為不區分抗原抗體的檢測試劑和區分抗原抗體的檢測試劑。不區分抗原抗體的檢測試劑已在臨床廣泛應用，常見試劑品牌有北京金豪、珠海麗珠、廈門新創、北京萬泰等[36]。區分抗原抗體的檢測試劑能分別檢測HIV-1 p24抗原和HIV抗體，便于制定后續復檢和補充試驗策略[19]。VIDAS HIV Duo Ultra是第1個區分p24抗原和HIV抗體的檢測試劑[37]，Bourlet等[37]的研究表明其靈敏度為100%和特異度為99.86%，可用于HIV的早期檢測。近年來研發的基于化學發光平臺的區分抗原抗體的檢測試劑如Elecsys? HIV Duo assay[38]、LIAISON? XL murex HIV Ab/Ag HT assay[39]、BioPlex 2200 HIV Ag-Ab assay[40]及北京科美生物技術有限公司生產的HIV Ag/Ab檢測試劑盒[41]等，在HIV感染早期的臨床篩查中的檢測性能已經得到驗證。
4.4 HIV抗體確證試驗
HIV抗體確證試驗包括免疫印跡法、條帶/線性免疫試驗、間接免疫熒光和快速確證等方法，是初篩陽性患者診斷HIV感染的主要方法[19]。然而，由于HIV感染存在窗口期，部分AHI患者的抗體確證試驗為陰性或不確定，該方法在AHI檢測中的意義相對有限[42-43]。為減少AHI的漏診，對抗體確證試驗不確定或確證試驗陰性但疑似AHI的患者，應盡快進行HIV-1核酸檢測[19]。
5 結語
綜上所述，HIV暴露前預防和暴露后預防能夠明顯減少高危人群的HIV感染風險，AHI患者盡早接受高效抗反轉錄病毒治療同樣能減少HIV的傳播風險，但新的問題也隨之而來[44]。對于處于檢測窗口期的AHI患者，錯誤地接受HIV暴露前預防可能誘導HIV耐藥發生，并且HIV暴露前預防可導致AHI患者的HIV抗體延遲出現和病毒載量水平降低，增加漏診可能以及耐藥發生風險[44]。接受過HIV暴露后預防和在Fiebig Ⅰ-Ⅳ期開始高效抗反轉錄病毒治療的AHI患者同樣可能遭遇HIV-1p24抗原和HIV-1/2抗體的延遲出現和病毒載量降低[44-46]。這些都對現有的HIV實驗室檢測方法和檢測流程帶來新的挑戰。
值得一提的是，隨著第4代HIV抗原抗體聯合檢測越來越廣泛地被臨床實驗室用于HIV感染的初步篩查，以及核酸定性和定量檢測被納入補充試驗用于HIV感染的診斷，加之“應檢盡檢”觀念的普及，AHI的早期篩查和診斷較之前已有很大的進步。然而，HIV檢測的窗口期始終存在，同時現有的檢測方法也還存在假陽性的問題，在臨床實際工作中依然會遇到難以診斷的AHI患者。因此，尋找新的AHI診斷標志物并建立靈敏度更高、假陽性率更低、簡便快速的AHI檢測方法是十分必要的。
利益沖突：所有作者聲明不存在利益沖突。
人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）感染引起的獲得性免疫缺陷綜合征（acquired immunodeficiency syndrome，AIDS）簡稱艾滋病，是全球重大衛生問題之一。截至2020年10月底，我國報告的現存活HIV/AIDS患者104.5萬例，當年新增HIV感染者11.2萬例[1]。目前我國HIV疫情整體處于低流行狀態，但西南地區流行率相對較高[2]。HIV感染急性期（acute HIV infection，AHI）患者體內病毒載量高，導致傳播風險高，如果能及時發現HIV感染并開展高效抗反轉錄病毒治療以降低病毒載量，能有效減少傳播[3]。然而，現有檢測技術和診斷水平并不能完全發現AHI患者并對其及時采取干預措施，這可能是目前HIV流行率居高不下的主要原因[4]。盡管每個HIV/AIDS患者均會經歷急性期，但由于大多數AHI患者沒有明顯臨床癥狀或癥狀輕微且缺乏特異性，加之試劑檢測窗口期等影響，很少能夠準確及時地診斷HIV急性感染[4-5]。近年來，檢測技術的進展縮短了HIV檢測窗口期，提高了HIV急性感染的診斷能力，本文對HIV急性感染的實驗室檢測進展進行綜述，旨在為后續研究提供參考。
1 AHI的定義
中國艾滋病診療指南（2018年版）中AHI的診斷標準是患者半年內有流行病學史或急性HIV感染綜合征，HIV抗體篩查試驗陽性和HIV補充試驗陽性[6]。歐洲臨床艾滋病學會指南（2021版）中將AHI定義為從檢測出HIV RNA和/或p24抗原到檢測出HIV抗體之間的時期，而將從血漿中HIV抗體開始轉陽到感染后6個月定義為近期感染，AHI和近期感染合稱為原發性HIV感染[7]。美國衛生與公眾服務部2021年更新的成人和青少年HIV患者抗反轉錄藥物使用指南中把AHI定義為血漿或血清中可檢測出HIV RNA或p24抗原且HIV抗體檢測結果陰性或不確定[8]。Yerly等[5]將AHI解釋為急性HIV感染綜合征加上實驗室檢測出免疫學特征和/或病毒學特征。基于這種想法，Fiebig等[9]根據HIV-1 RNA、HIV-1 p24抗原、免疫球蛋白M抗體、免疫球蛋白G抗體以及p31抗體出現時間，將原發性HIV感染分為6期，其中Ⅰ～Ⅴ期即為AHI，這一定義被廣泛認可。隨著第4代HIV抗原抗體聯合檢測試劑的應用，Ananworanich等[10]根據HIV-1 RNA、第4代HIV抗原抗體聯合檢測試劑、第3代HIV抗體檢測試劑等結果，對AHI再次進行分期，這種方法適合在實驗室使用。因此，目前AHI公認的定義是從檢測出HIV-1 RNA或p24抗原到檢測出HIV抗體之間的時間，但其受檢測試劑靈敏度影響。
2 AHI的傳播風險
在AHI階段，病毒在體內高水平復制，呈現一過性的高病毒血癥狀態，且生殖道分泌物和血液中的病毒載量均高，導致傳播風險高[11-12]。Quinn等[13]的研究表明，AHI患者血液中病毒載量每增加10倍，傳播風險增加2.5倍。Miller等[14]的研究顯示，原發性HIV感染通過性傳播的感染率比無癥狀期高26倍。Powers等[15]和Bellan等[16]的研究表明，10%～50%的HIV傳播來源于AHI患者等早期感染者。及時準確地診斷AHI并盡早進行高效抗反轉錄病毒治療，將患者體內的病毒載量降低至200拷貝/mL以下，能有效減少傳播風險，從而阻斷HIV在人群中的進一步流行[8]。
3 AHI的臨床表現
AHI的臨床癥狀缺乏特異性，主要表現為急性HIV感染綜合征，即初次感染HIV的1個月內出現發熱、咽痛、皮疹、肌肉關節痛、淋巴結腫大、頭痛、腹瀉、惡心、嘔吐等一系列臨床表現[6, 17]。快速進展者可能出現嚴重感染或者中樞神經系統癥狀體征及疾病[6]。值得注意的是，AHI患者早期通常無明顯臨床癥狀，可能導致漏診。Robb等[4]的前瞻性研究顯示，71%的AHI患者在感染早期無臨床癥狀，而50%的AHI患者在早期既無臨床癥狀，也沒有相應體征。此外，感染者在AHI階段所表現出的癥狀數量和嚴重程度與感染之后體內病毒峰值水平以及病毒調定點水平有明顯的相關性[18-19]。因此，AHI的相關臨床表現也可以作為患者感染后體內病毒水平的參考，并與其他實驗室檢測指標及患者的高危行為史等結合，用于判斷患者是否有AHI。
4 AHI的實驗室檢測
由于臨床癥狀缺乏特異性，AHI的篩查和診斷非常依賴于實驗室檢測。HIV感染依次出現的實驗室指標分別為HIV-1 RNA、HIV-1 p24抗原和HIV抗體。HIV-1 RNA和HIV-1 p24抗原是血漿中循環病毒顆粒的組成部分，在HIV抗體出現前即可檢測出，因此HIV核酸檢測、HIV抗原檢測和HIV抗原抗體聯合檢測在AHI的發現和診斷上具有重要的意義。
4.1 HIV核酸檢測
HIV-1 RNA在HIV感染后第10～12天可用聚合酶鏈反應或其他核酸擴增技術檢測出，是首個出現的病毒標志物[7, 18]。目前，HIV-1 RNA檢測主要在條件較好的實驗室開展，靈敏度可達100%，特異度約為90%，但有時會有2%～5%的假陽性結果[19]。
根據全國艾滋病檢測技術規范（2020修訂版），補充試驗包括HIV抗體確證試驗和HIV-1核酸試驗[20]。因為對HIV感染者的檢測存在窗口期，部分AHI患者HIV抗體確證試驗結果為陰性或不確定，核酸試驗成為AHI最常用有效的補充試驗。HIV核酸試驗包括核酸定性試驗和核酸定量試驗，全球目前正式用于臨床診斷HIV-1急性期感染的核酸定性檢測試劑較少，主要為美國食品藥品監督管理局批準的Gen-Probe公司生產的Aptima HIV-1 RNA核酸定性檢測試劑和歐洲聯盟批準的Abbott M2000 HIV-1 RNA/DNA定性檢測試劑。我國臨床實驗室主要應用的是HIV-1核酸定量檢測，常見試劑品牌有羅氏、達安基因、珠海麗珠、NEPG等[21-22]。盡管定量試劑存在假陽性的可能，但假陽性檢測結果通常比真正的AHI患者的病毒載量低很多，因此對于核酸定量試劑檢測低值（<5000拷貝/mL）的患者，應重新采樣檢測[17]。HIV核酸定量檢測>5000拷貝/mL與HIV核酸定性檢測陽性均已被中國艾滋病診療指南（2018年版）以及艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標準（WS293-2019）納入補充試驗陽性標準，HIV抗體初篩陽性且補充試驗陽性者可診斷HIV感染[6, 17]。
除臨床實驗室常用的實時熒光定量反轉錄聚合酶鏈反應外，核酸快速檢測試劑例如AlereTM q HIV-1/2 Detect試劑、AptimaTM HIV-1 Quant Dx Assay試劑、Xpert? HIV-1 Qual Assay試劑等已取得世界衛生組織的資格預審[23]，這些試劑的推廣將有助于AHI患者的早期自檢和偏遠地區的HIV檢測。
4.2 HIV抗原檢測
4.2.1 針對p24抗原的現有檢測
在HIV-1 RNA檢出后3～8 d可檢測到第2個AHI標志物HIV-1 p24抗原，相對于HIV-1 RNA，p24抗原常用的檢測方法（酶聯免疫吸附試驗、電化學發光法、酶聯熒光分析法等）更加快速、廉價，因此p24抗原通常被用于AHI等早期感染者的初步篩查[9, 20, 24]。但隨著HIV感染病程的進展，患者體內產生特異性p24抗體，與p24抗原形成抗原抗體復合物，導致患者血清中的p24抗原逐漸消失；到病程晚期，由于HIV/AIDS患者體內免疫系統遭到嚴重破壞，無法產生足量的p24抗體，p24抗原才在感染者血清中再次被檢出。由于HIV-1 p24抗原只在HIV感染初期和病程晚期可出現，難以單獨用于HIV的篩查，基于p24抗原的HIV初篩試劑通常會聯合檢測HIV抗體，即第4代HIV抗原抗體聯合檢測[20]。
4.2.2 檢測新進展
HIV-1 tat蛋白是HIV-1在感染早期即可大量產生的一種調節蛋白，tat蛋白可被釋放至宿主細胞外并在血清中被檢出，近年來被認為有望成為新的AHI實驗室檢測標志物[25]。研究者們已經研發了tat蛋白的許多檢測方法，包括傳統的酶聯免疫吸附試驗、免疫印跡法等基于抗原抗體反應的檢測[24]，也包括基于適配體的新型檢測方法[26]。然而，相比已經在臨床實驗室中廣泛使用的p24抗原，tat蛋白在AHI檢測中的效能以及相應檢測方法在臨床實驗室中的可行性仍有待進一步研究進行評價。
核酸適配體是一種單鏈DNA或RNA，適配體可以形成特定的二級或三級結構，從而使其高度特異性結合一系列靶物質（包括多肽、蛋白、細菌、細胞等），因此也被稱為“人造抗體”[27]。適配體具備高度化學穩定性和結合親合力、方便化學修飾、廉價的特點，因此基于適配體的生物標志物檢測技術已經被廣泛研究[27]。利用指數級富集配體系統進化技術，研究者們篩選出許多靶向HIV的適配體，例如詹少兵等[28]篩選出靶向HIV-1 p24抗原的適配體；Yamamoto等[29]篩選出靶向HIV tat蛋白的適配體；Caglayan等[26]利用適配體和橢圓偏振光譜建立高靈敏度的HIV-1 tat蛋白檢測新方法。
此外，近年來還出現了許多不依賴于適配體的HIV抗原檢測新方法，例如Liu等[30]利用微流控芯片建立HIV-1 p24抗原的可視化半定量檢測；Zhan等[31]基于金納米粒子的側流免疫分析建立HIV-1 p24抗原的即時檢驗方法。這些方法若能實現轉化并應用于臨床將有助于改善AHI的實驗室檢測。
4.3 HIV抗原抗體聯合檢測
目前的第4代HIV抗原抗體聯合檢測技術能夠替代單純HIV-1 p24抗原檢測，在臨床上已經被廣泛使用。第4代HIV抗原抗體聯合檢測的窗口期為13～25 d，優于第3代HIV抗體檢測（18～29 d）[18, 32]，對于無癥狀期HIV感染的靈敏度可達99.7%～100%，特異度可達99%～100%[32-33]，對于免疫印跡試驗陰性而HIV-1 RNA陽性的AHI的檢測靈敏度可達54%～83%[33-34]。Zhang等[35]研究發現47例第4代抗原抗體聯合檢測陽性的AHI患者中，22.7%的患者第3代抗體檢測結果為陰性，提示第4代試劑可顯著減少AHI的漏檢。此外，第4代HIV抗原抗體聯合檢測試劑可分為不區分抗原抗體的檢測試劑和區分抗原抗體的檢測試劑。不區分抗原抗體的檢測試劑已在臨床廣泛應用，常見試劑品牌有北京金豪、珠海麗珠、廈門新創、北京萬泰等[36]。區分抗原抗體的檢測試劑能分別檢測HIV-1 p24抗原和HIV抗體，便于制定后續復檢和補充試驗策略[19]。VIDAS HIV Duo Ultra是第1個區分p24抗原和HIV抗體的檢測試劑[37]，Bourlet等[37]的研究表明其靈敏度為100%和特異度為99.86%，可用于HIV的早期檢測。近年來研發的基于化學發光平臺的區分抗原抗體的檢測試劑如Elecsys? HIV Duo assay[38]、LIAISON? XL murex HIV Ab/Ag HT assay[39]、BioPlex 2200 HIV Ag-Ab assay[40]及北京科美生物技術有限公司生產的HIV Ag/Ab檢測試劑盒[41]等，在HIV感染早期的臨床篩查中的檢測性能已經得到驗證。
4.4 HIV抗體確證試驗
HIV抗體確證試驗包括免疫印跡法、條帶/線性免疫試驗、間接免疫熒光和快速確證等方法，是初篩陽性患者診斷HIV感染的主要方法[19]。然而，由于HIV感染存在窗口期，部分AHI患者的抗體確證試驗為陰性或不確定，該方法在AHI檢測中的意義相對有限[42-43]。為減少AHI的漏診，對抗體確證試驗不確定或確證試驗陰性但疑似AHI的患者，應盡快進行HIV-1核酸檢測[19]。
5 結語
綜上所述，HIV暴露前預防和暴露后預防能夠明顯減少高危人群的HIV感染風險，AHI患者盡早接受高效抗反轉錄病毒治療同樣能減少HIV的傳播風險，但新的問題也隨之而來[44]。對于處于檢測窗口期的AHI患者，錯誤地接受HIV暴露前預防可能誘導HIV耐藥發生，并且HIV暴露前預防可導致AHI患者的HIV抗體延遲出現和病毒載量水平降低，增加漏診可能以及耐藥發生風險[44]。接受過HIV暴露后預防和在Fiebig Ⅰ-Ⅳ期開始高效抗反轉錄病毒治療的AHI患者同樣可能遭遇HIV-1p24抗原和HIV-1/2抗體的延遲出現和病毒載量降低[44-46]。這些都對現有的HIV實驗室檢測方法和檢測流程帶來新的挑戰。
值得一提的是，隨著第4代HIV抗原抗體聯合檢測越來越廣泛地被臨床實驗室用于HIV感染的初步篩查，以及核酸定性和定量檢測被納入補充試驗用于HIV感染的診斷，加之“應檢盡檢”觀念的普及，AHI的早期篩查和診斷較之前已有很大的進步。然而，HIV檢測的窗口期始終存在，同時現有的檢測方法也還存在假陽性的問題，在臨床實際工作中依然會遇到難以診斷的AHI患者。因此，尋找新的AHI診斷標志物并建立靈敏度更高、假陽性率更低、簡便快速的AHI檢測方法是十分必要的。
利益沖突：所有作者聲明不存在利益沖突。