人孤雌胚胎干細胞無飼養層培養體系的建立_《中國修復重建外科雜志》

作者：

梁銳 ¹ , 王志強 ² , 陳天星 ¹ , 朱靜 ¹ , 朱姝 ³ , 李英 ¹ , 楊龍 ¹ , 朱寶生 ³

云南省第一人民醫院（昆明，650032）1病理科，3遺傳診斷中心;;
2昆明醫科大學第一附屬醫院腫瘤科;

關鍵詞：

人孤雌胚胎干細胞無飼養層條件培養基人包皮成纖維細胞

DOI：

10.7507/1002-1892.20130124

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目的建立一種安全、有效、經濟且適于人孤雌胚胎干細胞（human parthenogenetic embryonic stem cells，hPESCs）體外培養的無飼養層培養體系。方法將常規體外培養的hPESCs分別以mTeSRTMl培養基（對照組）和人包皮成纖維細胞的條件培養基（human foreskin fibroblasts-conditional medium，hFFs-CM）（實驗組）擴增培養，倒置顯微鏡下觀察兩組無飼養層培養體系下hPESCs的生長狀態；采用ALP檢測和核型分析研究hPESCs生物學特性；采用RT-PCR檢測hPESCs全能性標記物Oct-4的表達情況；通過體外和體內分化實驗觀察hPESCs向3個胚層分化的潛能。結果兩組hPESCs形態規則、不易分化，在形態、擴增速度等方面無明顯差異；已成功在體外培養15代，兩組均能保持正常女性的二倍體核型46，XX和全能性；RT-PCR檢測示兩組Oct-4 mRNA均呈陽性表達；體外分化均可形成擬胚體；在裸鼠體內均可形成含有3個胚層組織成分的畸胎瘤。結論hFFs-CM無飼養層培養體系可長期支持hPESCs的生長并維持其未分化狀態，成功建立了一種不僅能維持hPESCs的有效擴增、減少動物源性污染、降低培養成本，還可滿足臨床大規模應用的hPESCs無飼養層培養體系。

引用本文： 梁銳,王志強,陳天星,朱靜,朱姝,李英,楊龍,朱寶生. 人孤雌胚胎干細胞無飼養層培養體系的建立. 中國修復重建外科雜志, 2013, 27(5): 559-564. doi: 10.7507/1002-1892.20130124 復制

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