引用本文： 李川, 陳翔, 文天夫. IQGAP1在肝細胞肝癌組織中的表達及臨床意義. 中國普外基礎與臨床雜志, 2015, 22(10): 1214-1217. doi: 10.7507/1007-9424.20150314 復制
原發性肝癌是世界上第6大常見腫瘤，占腫瘤相關性死亡原因第3位[1-5]。由于我國乙肝感染率較高，我國的肝癌患者約占全球肝癌患者的55% [6-7]。外科手術切除是肝癌的根治性治療措施之一。但即使是巴塞羅那分期A期的肝癌患者，術后5年復發率仍高達50%～70%[8]。研究肝癌術后的復發機理有助于防治肝癌術后復發。本研究擬探討肝細胞肝癌組織中含IQ模體的Ras GTP酶活化蛋白1（IQGAP1）的表達及其與肝癌患者臨床病例特征及其預后的關系。
1 資料與方法
1.1 標本來源
選取筆者所在醫院2007～2009年期間行肝癌切除治療的79例肝細胞肝癌患者的肝癌組織標本，所有肝癌患者均經病理學檢查證實為肝細胞肝癌。同時收集患者術前一般資料及病理資料。
1.2 隨訪
本研究所選取的病例術后常規每3個月隨訪1次。隨訪內容包括：肝功能、血常規、甲胎蛋白（AFP）、血常規、腹部超聲/CT/MRI、胸部X平片或胸部CT。患者術后復發定義為：術后隨訪影像學檢查與之前影像學檢查比較發現新發病灶，伴/不伴AFP升高；或經病理學檢查證實[9-10]。
1.3 肝癌組織中IQGAP1表達檢測
所選取的肝癌組織標本經常規甲醛固定、石蠟包埋，連續3μm厚切片。采用免疫組織化學染色PV-9000兩步法（試劑購自Santa Cruz公司）。DAB顯色，蘇木精復染，操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。抗IQGAP1抗體購自Santa Cruz公司。以細胞胞質和（或）胞膜出現黃色顆粒為陽性細胞，隨機選取5個高倍視野計數，以陽性細胞數和著色強度乘積判斷結果。著色強度計分：0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色。陽性細胞計分：無陽性細胞為0分，陽性細胞< 10%為1分，陽性細胞10%～50%為2分，50%～75%為3分，> 75%為4分。兩者得分乘積結果：≤3分者為（-）；4～8分者為（+）；> 8分者（++），（+）和（++）均視為陽性。
1.4 統計學方法
計量資料以均數±標準差（
2 結果
2.1 79例患者的一般臨床資料
本次研究共納入79例肝細胞肝癌患者，所有患者均經病理學檢查明確診斷。79例患者中男72例，女7例；年齡32～74歲，均數為（50.9±12.2）歲；腫瘤直徑1.3～5.0 cm，均數為（3.3±1.0）cm；有3例患者腫瘤數> 1個(腫瘤2～3個)；腫瘤分化程度：低分化23例，中分化45例，高分化11例；21例患者存在腫瘤微血管侵犯；26例患者術前甲胎蛋白（AFP）大于400μg/L；TNM分期：Ⅰ期56例，Ⅱ期23例。
2.2 肝癌組織中IQGAP1的表達及與其臨床病理特征的關系
本組79例肝癌患者中43例的IQGAP1表達陽性，陽性率為54.4%，圖 1和圖 2分別示肝癌組織中IQGAP1陰性和陽性表達。肝癌組織中IQGAP1的表達與其臨床病理特征間的關系分析結果見表 1。由表 1可見，肝癌組織中IQGAP1表達陽性的患者中其低分化腫瘤（41.9%）且伴有微血管侵犯（37.2%）者的比例要高于IQGAP1表達陰性者（P < 0.05），而IQGAP1的表達與患者的年齡、性別、腫瘤大小及分化程度無關（P > 0.05）。
圖1
示肝癌組織中IQGAP1陰性表達??圖 2??示肝癌組織中IQGAP1陽性表達
表1
79例肝細胞肝癌患者肝癌組織中IQGAP1的表達與其臨床病理特征的關系
2.3 肝癌組織中IQGAP1表達與患者預后關系分析結果
79例患者肝癌切除術后均獲隨訪，隨訪時間6～85個月，均數為（58.3±20.0）個月。術后（27.57±20.06）個月（4～74個月）有42例患者出現腫瘤局部復發，復發率為53.2%；術后（36.48±16.11）個月（6～66個月）有25例患者死亡，死亡率為31.6%。所有患者均死于腫瘤復發。IQGAP1表達陽性者肝癌切除術后1、3及5年累積無瘤生存率分別為67.4%、39.5%及23.3%，明顯低于IQGAP1表達陰性者的100%、94.4%及83.3%，其差異有統計學意義（P < 0.001），見圖 3；IQGAP1表達陽性者肝癌切除術后1、3及5年累積總體生存率為97.7%、71.5%和53.3%，明顯低于IQGAP1表達陰性者的100%、97.2%和88.9%，其差異也有統計學意義（P < 0.001），見圖 4。
圖3
示肝癌組織中IQGAP1表達陽性與陰性患者的累積無瘤生存曲線??圖 4??示肝癌組織中IQGAP1表達陽性與陰性患者的累積總體生存曲線
3 討論
IQGAPs是一類以包含IQ表位及類似于Ras-GTP催化活性表位為特征的蛋白家族，目前在人體內已發現了3個成員，即IQGAP1、IQGAP2和IQGAP3，IQGAP1包含4個可與其他蛋白相結合的功能域，即Calponin同源性結構域、WW結構域、IQ結構域和Ras-GTP酶活化蛋白相關結構域[11-12]。有研究[13-15]顯示，IQGAP1在多種腫瘤中的表達異常升高，如非小細胞肺癌、乳腺癌、結直腸癌、星形細胞癌、胃癌等。Wang等[16]對胰腺癌的研究顯示，胰腺癌組織中IQGAP1的表達明顯高于癌旁組織，且IQGAP1在胰腺癌中的表達與胰腺癌的分化相關。Zhao等[13]對非小細胞肺癌的研究顯示，IQGAP1表達陽性者的預后明顯較表達陰性者差。本研究結果亦證實，在肝細胞肝癌中，IQGAP1表達陽性者肝癌切除術后1、3及5年的累積無瘤生存率及總體生存率均較IQGAP1表達陰性者差（P < 0.001）。
肝癌微血管侵犯是肝癌術后復發的高危因素。有研究[17-18]證實，肝切除術、射頻消融術及肝移植術后，存在微血管侵犯者術后腫瘤易復發。本研究發現，IQGAP1表達陽性的肝癌患者其伴微血管侵犯者的比例（37.2%）高于IQGAP1表達陰性者（13.9%），P < 0.05。這可能是IQGAP1表達陽性的肝癌患者術后易于復發的原因之一。但具體機理不清楚。Liu等[19]的研究顯示，在甲狀腺濾泡性乳頭狀癌中，IQGAP1的表達與腫瘤甲狀腺外侵犯及血管侵犯相關。
有研究[20-21]證明，腫瘤的分化程度與患者預后密切相關。肝癌肝移植的杭州標準[22]甚至認為部分腫瘤直徑大于8 cm的肝細胞肝癌只要AFP≤400μg/L并排除低分化者也適合肝移植。DuBey等[23]甚至認為，對于超過米蘭標準的肝癌患者只要排除低分化均可考慮行肝移植治療。本研究發現，IQGAP1表達陽性的肝癌患者其低分化者的比例（41.9%）高于IQGAP1表達陰性者（13.9%），P < 0.05。這可能是IQGAP1影響肝癌患者肝切除術后預后的原因之一。
IQGAP1影響肝細胞肝癌預后的具體機理目前尚不清楚。對結直腸癌SW480細胞系的研究[24]發現，過表達IQGAP1能夠促進β-catenin向細胞核內轉移，從而影響結直腸癌細胞的凋亡與增殖。Liu等[19]的研究顯示，在甲狀腺濾泡性乳頭狀癌中，IQGAP1的表達與甲狀腺外侵犯及血管侵犯相關，敲除IQGAP1后，抑制轉移的E-catenin表達水平明顯升高。這些研究均證明IQGAP1能夠影響腫瘤的增殖與轉移[13, 25]。但IQGAP1影響肝細胞肝癌的具體機理還需進一步研究。
綜上，本研究結果顯示IQGAP1表達陽性的肝癌患者預后較差。但IQGAP1影響肝癌肝切除術后預后的機體機理目前尚不清楚。
原發性肝癌是世界上第6大常見腫瘤，占腫瘤相關性死亡原因第3位[1-5]。由于我國乙肝感染率較高，我國的肝癌患者約占全球肝癌患者的55% [6-7]。外科手術切除是肝癌的根治性治療措施之一。但即使是巴塞羅那分期A期的肝癌患者，術后5年復發率仍高達50%～70%[8]。研究肝癌術后的復發機理有助于防治肝癌術后復發。本研究擬探討肝細胞肝癌組織中含IQ模體的Ras GTP酶活化蛋白1（IQGAP1）的表達及其與肝癌患者臨床病例特征及其預后的關系。
1 資料與方法
1.1 標本來源
選取筆者所在醫院2007～2009年期間行肝癌切除治療的79例肝細胞肝癌患者的肝癌組織標本，所有肝癌患者均經病理學檢查證實為肝細胞肝癌。同時收集患者術前一般資料及病理資料。
1.2 隨訪
本研究所選取的病例術后常規每3個月隨訪1次。隨訪內容包括：肝功能、血常規、甲胎蛋白（AFP）、血常規、腹部超聲/CT/MRI、胸部X平片或胸部CT。患者術后復發定義為：術后隨訪影像學檢查與之前影像學檢查比較發現新發病灶，伴/不伴AFP升高；或經病理學檢查證實[9-10]。
1.3 肝癌組織中IQGAP1表達檢測
所選取的肝癌組織標本經常規甲醛固定、石蠟包埋，連續3μm厚切片。采用免疫組織化學染色PV-9000兩步法（試劑購自Santa Cruz公司）。DAB顯色，蘇木精復染，操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。抗IQGAP1抗體購自Santa Cruz公司。以細胞胞質和（或）胞膜出現黃色顆粒為陽性細胞，隨機選取5個高倍視野計數，以陽性細胞數和著色強度乘積判斷結果。著色強度計分：0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色。陽性細胞計分：無陽性細胞為0分，陽性細胞< 10%為1分，陽性細胞10%～50%為2分，50%～75%為3分，> 75%為4分。兩者得分乘積結果：≤3分者為（-）；4～8分者為（+）；> 8分者（++），（+）和（++）均視為陽性。
1.4 統計學方法
計量資料以均數±標準差（
2 結果
2.1 79例患者的一般臨床資料
本次研究共納入79例肝細胞肝癌患者，所有患者均經病理學檢查明確診斷。79例患者中男72例，女7例；年齡32～74歲，均數為（50.9±12.2）歲；腫瘤直徑1.3～5.0 cm，均數為（3.3±1.0）cm；有3例患者腫瘤數> 1個(腫瘤2～3個)；腫瘤分化程度：低分化23例，中分化45例，高分化11例；21例患者存在腫瘤微血管侵犯；26例患者術前甲胎蛋白（AFP）大于400μg/L；TNM分期：Ⅰ期56例，Ⅱ期23例。
2.2 肝癌組織中IQGAP1的表達及與其臨床病理特征的關系
本組79例肝癌患者中43例的IQGAP1表達陽性，陽性率為54.4%，圖 1和圖 2分別示肝癌組織中IQGAP1陰性和陽性表達。肝癌組織中IQGAP1的表達與其臨床病理特征間的關系分析結果見表 1。由表 1可見，肝癌組織中IQGAP1表達陽性的患者中其低分化腫瘤（41.9%）且伴有微血管侵犯（37.2%）者的比例要高于IQGAP1表達陰性者（P < 0.05），而IQGAP1的表達與患者的年齡、性別、腫瘤大小及分化程度無關（P > 0.05）。
圖1
示肝癌組織中IQGAP1陰性表達??圖 2??示肝癌組織中IQGAP1陽性表達
表1
79例肝細胞肝癌患者肝癌組織中IQGAP1的表達與其臨床病理特征的關系
2.3 肝癌組織中IQGAP1表達與患者預后關系分析結果
79例患者肝癌切除術后均獲隨訪，隨訪時間6～85個月，均數為（58.3±20.0）個月。術后（27.57±20.06）個月（4～74個月）有42例患者出現腫瘤局部復發，復發率為53.2%；術后（36.48±16.11）個月（6～66個月）有25例患者死亡，死亡率為31.6%。所有患者均死于腫瘤復發。IQGAP1表達陽性者肝癌切除術后1、3及5年累積無瘤生存率分別為67.4%、39.5%及23.3%，明顯低于IQGAP1表達陰性者的100%、94.4%及83.3%，其差異有統計學意義（P < 0.001），見圖 3；IQGAP1表達陽性者肝癌切除術后1、3及5年累積總體生存率為97.7%、71.5%和53.3%，明顯低于IQGAP1表達陰性者的100%、97.2%和88.9%，其差異也有統計學意義（P < 0.001），見圖 4。
圖3
示肝癌組織中IQGAP1表達陽性與陰性患者的累積無瘤生存曲線??圖 4??示肝癌組織中IQGAP1表達陽性與陰性患者的累積總體生存曲線
3 討論
IQGAPs是一類以包含IQ表位及類似于Ras-GTP催化活性表位為特征的蛋白家族，目前在人體內已發現了3個成員，即IQGAP1、IQGAP2和IQGAP3，IQGAP1包含4個可與其他蛋白相結合的功能域，即Calponin同源性結構域、WW結構域、IQ結構域和Ras-GTP酶活化蛋白相關結構域[11-12]。有研究[13-15]顯示，IQGAP1在多種腫瘤中的表達異常升高，如非小細胞肺癌、乳腺癌、結直腸癌、星形細胞癌、胃癌等。Wang等[16]對胰腺癌的研究顯示，胰腺癌組織中IQGAP1的表達明顯高于癌旁組織，且IQGAP1在胰腺癌中的表達與胰腺癌的分化相關。Zhao等[13]對非小細胞肺癌的研究顯示，IQGAP1表達陽性者的預后明顯較表達陰性者差。本研究結果亦證實，在肝細胞肝癌中，IQGAP1表達陽性者肝癌切除術后1、3及5年的累積無瘤生存率及總體生存率均較IQGAP1表達陰性者差（P < 0.001）。
肝癌微血管侵犯是肝癌術后復發的高危因素。有研究[17-18]證實，肝切除術、射頻消融術及肝移植術后，存在微血管侵犯者術后腫瘤易復發。本研究發現，IQGAP1表達陽性的肝癌患者其伴微血管侵犯者的比例（37.2%）高于IQGAP1表達陰性者（13.9%），P < 0.05。這可能是IQGAP1表達陽性的肝癌患者術后易于復發的原因之一。但具體機理不清楚。Liu等[19]的研究顯示，在甲狀腺濾泡性乳頭狀癌中，IQGAP1的表達與腫瘤甲狀腺外侵犯及血管侵犯相關。
有研究[20-21]證明，腫瘤的分化程度與患者預后密切相關。肝癌肝移植的杭州標準[22]甚至認為部分腫瘤直徑大于8 cm的肝細胞肝癌只要AFP≤400μg/L并排除低分化者也適合肝移植。DuBey等[23]甚至認為，對于超過米蘭標準的肝癌患者只要排除低分化均可考慮行肝移植治療。本研究發現，IQGAP1表達陽性的肝癌患者其低分化者的比例（41.9%）高于IQGAP1表達陰性者（13.9%），P < 0.05。這可能是IQGAP1影響肝癌患者肝切除術后預后的原因之一。
IQGAP1影響肝細胞肝癌預后的具體機理目前尚不清楚。對結直腸癌SW480細胞系的研究[24]發現，過表達IQGAP1能夠促進β-catenin向細胞核內轉移，從而影響結直腸癌細胞的凋亡與增殖。Liu等[19]的研究顯示，在甲狀腺濾泡性乳頭狀癌中，IQGAP1的表達與甲狀腺外侵犯及血管侵犯相關，敲除IQGAP1后，抑制轉移的E-catenin表達水平明顯升高。這些研究均證明IQGAP1能夠影響腫瘤的增殖與轉移[13, 25]。但IQGAP1影響肝細胞肝癌的具體機理還需進一步研究。
綜上，本研究結果顯示IQGAP1表達陽性的肝癌患者預后較差。但IQGAP1影響肝癌肝切除術后預后的機體機理目前尚不清楚。
