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自噬在慢性阻塞性肺疾病中的研究進展

慢性阻塞性肺疾病大鼠肺組織自噬相關蛋白的變化

目的研究在慢性阻塞性肺疾病（簡稱慢阻肺）大鼠肺組織中自噬相關蛋白的變化。 方法單純煙熏法構建慢阻肺大鼠動物模型，采用Real time PCR，Western blot技術檢測檢測大鼠肺組織中PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR及自噬相關基因LC3Ⅱ/Ⅰ、Atg5、Beclin1、P62、Atg7、Atg12的mRNA及蛋白表達，探討在慢阻肺大鼠肺組織中自噬水平及自噬相關蛋白的變化。用LC3B免疫組化比較COPD組與正常大鼠間自噬水平的變化。 結果Real time PCR分析結果顯示，與正常組相比，慢阻肺組大鼠肺組織中自噬相關基因Beclin1、Atg5、Atg12的mRNA表達顯著增高（P＜0.05，其中Beclin1、Atg5兩組比較P＜0.01）。Atg7的mRNA表達在慢阻肺組與正常組之間差異無統計學意義（P＞0.05）。Western blot分析結果顯示，慢阻肺組大鼠肺組織中PI3K蛋白、p-AKT/AKT及p-mTOR/mTOR蛋白表達顯著降低（P＜0.05）。自噬相關基因LC3Ⅱ/Ⅰ、Atg5、Beclin1蛋白表達增高（P＜0.05，其中LC3Ⅱ/Ⅰ、Atg5兩組比較P＜0.01）。P62蛋白表達顯著下降（P＜0.01）。LC3B免疫組化顯示，慢阻肺組LC3B表達高于正常組。 結論煙熏12周的慢阻肺大鼠與正常組相比，自噬通路上游蛋白PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR的表達降低，自噬蛋白表達增加，自噬水平增加。

自噬-溶酶體系統在慢性阻塞性肺疾病大鼠骨骼肌萎縮中的作用機制

目的探討自噬-溶酶體系統在慢性阻塞性肺疾病(簡稱慢阻肺)大鼠骨骼肌萎縮中的作用機制。 方法采用單純熏香煙法復制慢阻肺大鼠動物模型。采用Real time PCR,Western blot技術檢測大鼠趾長伸肌中FOXO轉錄因子以及自噬相關基因Bnip3、Beclin1、p62、MAP-LC3Ⅱ/Ⅰ、Atg5的mRNA及蛋白表達,探討自噬-溶酶體系統在慢阻肺大鼠骨骼肌萎縮中的作用機制,進一步探索骨骼肌萎縮的機制。用透射電鏡觀察對照組和實驗組大鼠趾長伸肌組織切片及肺組織切片中的變化。 結果Real time PCR分析結果顯示,實驗組大鼠趾長伸肌組織中FOXO轉錄因子以及自噬相關基因Bnip3、Beclin1、p62、Atg5的mRNA表達實驗組顯著高于對照組(P均<0.05,其中Bnip3兩組對照P均<0.01)。兩組大鼠MAP-LC3Ⅱ/Ⅰ的mRNA表達比較差異無統計學意義(P>0.05)。Western blot分析結果顯示,實驗組大鼠趾長伸肌組織中FOXO轉錄因子以及自噬相關基因Bnip3、Beclin1、p62、MAP-LC3Ⅱ/Ⅰ、Atg5的蛋白表達慢阻肺組顯著高于對照組(P均<0.05,其中Bnip3,MAP-LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1兩組對照P均<0.01)。透射電鏡下,相比于對照組,實驗組大鼠趾長伸肌胞漿內自噬溶酶體增多,肺組織切片中發現肺組織纖維化和炎癥細胞增多。 結論實驗組大鼠趾長伸肌組織內自噬-溶酶體系統被激活,可能是骨骼肌萎縮的機制之一。

自噬相關蛋白及基因在非小細胞肺癌中的表達及其意義

目的檢測非小細胞肺癌患者肺組織標本中自噬相關基因和蛋白的表達情況。方法標本取自臨床疑診為非小細胞肺癌行手術切除的肺組織，其中肺癌組為病理診斷為非小細胞肺癌的組織，正常組為遠離肺部病灶 5 cm 以外的組織（肺癌組 29 例，正常組 32 例）。采用 Western blot 檢測自噬相關蛋白 ATG5、LC3B、p62 的蛋白表達情況；采用實時–聚合酶鏈反應（RT-PCR）方法檢測肺癌組織、正常組織中自噬相關基因 ATG5、p62 mRNA 的表達情況。結果Western blot 結果顯示自噬相關蛋白 ATG5 和 p62 在肺癌組中表達量增加，顯著高于正常組（P<0.05）；LC3B 在肺癌組織中表達量顯著低于正常組織（P<0.05）。RT-PCR 結果顯示肺癌組的 ATG5、p62 mRNA 水平均顯著高于正常組（P<0.05）。ATG5、LC3B、p62 的蛋白相對表達量在性別、年齡、吸煙史、腫瘤部位、腫瘤大小、腫瘤病理類型、分化程度以及腫瘤 TNM 分期各組間差異無統計學意義（P>0.05）。ATG5 的蛋白表達量在淋巴結是否轉移組間差異有統計學意義（P<0.05）；LC3B、p62 蛋白表達量在淋巴結是否轉移組間差異無統計學意義（P>0.05）。結論自噬在肺癌的發生中發揮一定的作用。自噬相關基因和蛋白若能夠正確有效調控，可能會對未來臨床治療方面提供新的依據和靶點。