目的 對乳豬竇房結所在部位進行準確定位，建立一套可靠的竇房結細胞取材、分離、純化培養技術；觀察竇房結細胞與Col Ⅰ纖維支架的相容性。 方 法 24 h 內新生純種長白山乳豬5 只，雌雄不拘，體重0.45 ～ 0.55 kg。實驗動物采用多導電生理記錄儀標記房波最早出現的部位，在該位置取材行原代竇房結細胞培養，分別采用常規方法培養和差速貼壁分離技術、5-BrdU 處理純化培養；于左心房部位取材行心房肌細胞純化培養作為對照。倒置顯微鏡觀察細胞形態、細胞貼壁時間、單細胞出現搏動時間、搏動頻率等。將純化培養的竇房結細胞以5 × 105 個/mL 密度接種至經預濕處理的Col Ⅰ纖維支架復合培養5 d，行HE 染色觀察及掃描電鏡觀察。 結果 房波最早出現的位置即為竇房結所在部位。純化培養的竇房結細胞有3 種形態，即梭形、三角形與不規則形，其中梭形細胞最多；心房肌細胞主要為三角形及不規則形，而無梭形細胞。竇房結細胞純化培養與常規培養比較，梭形細胞所占比例分別為73.0% ± 2.9%、44.7% ± 2.3%，二者差異有統計學意義（P lt; 0.01）；不規則形細胞分別為7.0% ± 1.7%、36.1% ± 2.6%，二者差異有統計學意義（P lt; 0.01）；三角形細胞分別為20.0% ± 2.1%、19.2% ± 2.5%，二者差異無統計學意義（P gt; 0.05）。竇房結細胞復合Col Ⅰ纖維支架培養5 d，HE 染色觀察示Col Ⅰ纖維支架材料中有大量細胞；掃描電鏡見細胞成團吸附于支架表面及孔隙側壁，并可見細胞間通過突起相互連接，或伸出偽足貼附于支架孔隙壁上。 結論 通過準確竇房結定位，采用差速貼壁結合5-BrdU 處理的純化培養可明顯提高乳豬竇房結梭形細胞比例，是一種可靠的竇房結細胞純化培養技術。竇房結細胞和Col Ⅰ纖維支架有較好的細胞相容性。
目的 研究成肌細胞移植治療假肥大型肌營養不良癥（duchenne muscular dystrophy，DMD）的效果，探討基因治療DMD 的方法及可行性。 方法 用多步酶消化法與差速貼壁法培養C57/BL10 小鼠成肌細胞，倒置相差顯微鏡觀察細胞形態。取第4 代細胞用5-BrdU 標記。將24 只DMD 模型鼠——mdx 小鼠（4 ～ 6 周齡，雄性，體重13.8 ～ 24.6 g）隨機分為兩組（n=12），A 組經尾靜脈分2 次（間隔2 周）注射1 × 106 個/mL 標記后成肌細胞，B 組同法注射1 mL DMEM/F12 培養基為對照。術后4 周采用一次性游泳力竭實驗檢測小鼠運動能力，處死后取材行HE 染色及5-BrdU、結蛋白、抗肌萎縮蛋白（dystrophin，Dys）免疫組織化學染色觀察，并行圖像分析。 結果 原代成肌細胞培養5 ～ 7 d 后即可傳代，可獲得穩定傳代及足量的細胞。A 組小鼠一次性游泳力竭時間為（60.72 ± 5.76）min，B 組為（47.77 ± 5.40） min，兩組比較差異有統計學意義（P lt; 0.01）。術后4 周HE 染色示A 組可見變成圓形且透明染色的肌細胞，肌纖維細胞核中心移位（centrally nucleated fibers，CNF）比例為67%；B 組肌纖維粗細不等，可見肥大、萎縮、變性和肌纖維壞死等改變，CNF 比例gt; 80%。免疫組織化學染色示，A 組5-BrdU、結蛋白、Dys 表達均呈陽性，B 組少見表達或呈陰性表達。圖像分析結果顯示，A、B 組結蛋白積分吸光度（IA）值分別為489.70 ± 451.83 和71.15 ± 61.14，陽性面積占視野總面積的比值分 別為0.314 3 ± 0.197 3 和0.102 8 ± 0.062 8（P lt; 0.05） ；Dys IA 值分別為5 424.64 ± 2 658.01 和902.12 ± 593.51（P gt; 0.05）， 陽 性面積占視野總面積的比值分別為0.323 7 ± 0.117 7 和0.035 2 ± 0.032 9（P lt; 0.05）。 結論 成肌細胞移植治療小鼠DMD 有一定的治療作用。