質量控制是指為達到質量要求所采取的作業技術和活動的總稱。進行質量控制既是實驗室自身發展的需要，也是實驗室認可機構對實驗室發展的硬性要求。進行質量控制首先要建立完整的質量控制體系，根據病理實驗流程分為分析前、分析中、分析后質量控制。特殊染色診斷技術與普通病理蘇木精伊紅染色有一些相似之處，但細微處又略顯不同。特殊染色項目種類繁多，每種染色步驟又紛雜多樣，難以按照常規病理染色的質量控制技術進行質量控制。該文旨在通過總結文獻和工作經驗，針對特殊染色技術的全程質量控制作一總結，為后續提高特殊染色質量貢獻綿薄之力。
引用本文： 陳昱, 楊眉, 羅添友, 毛志剛, 廖紅艷, 鄭沁. 特殊染色技術的規范化管理與全程質量控制. 華西醫學, 2021, 36(4): 535-538. doi: 10.7507/1002-0179.202004318 復制
質量控制是指為達到質量要求所采取的作業技術和活動的總稱。一張優質的切片是實現準確病理診斷的基礎和可靠保證，而質量控制則是實現這一目標的前提和必要條件[1-3]。建立病理技術的質量控制和質量保證體系，不僅是病理技術自身發展的需求，同時也是實驗室認可機構對病理實驗室發展的硬性要求[4]。目前，我國施行的醫學實驗室質量和能力認可準則（ISO 15189：2012）和美國病理學家協會（CAP）的認證體系均對病理技術的質量控制做了明確細致的要求[5-7]。
病理技術主要包括對病理樣本的收取、取材、制作、染色以及對病理資料的管理。特殊染色技術是病理技術的一個分支。特殊染色技術的質量控制與病理技術的質量控制有相似之處，但也具有其本身獨特的規律。按照病理標本工作流程的先后應分為染色前質量控制、染色中質量控制和染色后質量控制。本文將從以下幾個方面內容對特殊染色技術的全流程質量控制方法進行總結。
1 建立質量控制體系
進行病理技術的質量控制，質量控制負責人首先要建立一套完整的質量控制體系。根據質量控制體系的要求，建立相應的文件管理體系、實驗操作管理體系、實驗后質量控制體系等。文件管理體系對后續的操作管理體系和實驗后質量控制體系起指導作用[7]。
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文件管理體系包括質量方針、質量手冊、質量體系程序性文件和標準操作規程（standard operating procedures，SOP），以及與操作相關的各種記錄文件。
要實現質量控制目標，質量控制負責人首先要建立完整的管理文件體系。質量方針是實驗室的質量目標。質量手冊是實驗室實現質量目標，進行質量控制的綱領性文件；可對質量管理體系及其所用文件的框架進行描述，并對具體質量相關的操作提出明確質量要求。質量控制文件應包括技術程序在內的支持性程序和涉及質量管理的一般性文件，包括實驗室各項規章制度；概述質量管理體系文件的結構框架[7]。質量體系程序性文件是對質量手冊所規定的內容進行進一步拓展，是質量手冊的進一步擴展、延伸并細化。
實驗室要根據自身的發展目標、服務對象以及醫院的質量需求建立適合本實驗室的質量手冊和程序性文件，也就是“寫你所做的”。SOP 是依據質量手冊和程序性文件規定的內容而制定的用于指導病理技術實際操作的標準化操作指導文件。要求具體實用，簡單明了，具有統一性和可操作性。建立 SOP 文件，員工要嚴格遵守，規范操作。避免不同員工之間操作差異，甚至是錯誤操作而引起實驗誤差。最后，實驗室還應該建立完善的工作流程記錄，將各類實驗操作記錄下來，以便將來進行總結、備查、原始數據回溯。這不僅是實驗室自身工作的需求，同時也是為了降低醫療風險，解決醫療事故必不可少的“證據”。建立了完善的操作、記錄體系以后，實驗室還應該定期對各類操作記錄進行回顧總結，分析總結工作流程和效率，查漏補缺，總結經驗，以便進行下一步的質量改進[7]。
當建立了完善的質量管理體系后，實驗室管理人員和操作人員就應該按照質量管理體系的要求進行管理和操作。真正做到任何操作和制度都有規章可循，凡事都要按照標準化操作流程進行操作[7]。
2 染色前質量控制
染色前質量控制主要是從指組織采集到實驗室開始進行取材之前的質量控制。這往往是病理實驗室最容易忽視的環節。
2.1 標本接收
實驗室首先要明確規定接收標本的標準，對于不完全合格的標本進行區分，確定次優標本和不合格標本。次優標本在報告中應注明原因和可能對結果造成的影響。不合格標本應該拒收，并且對不合格標本產生較多的科室進行臨床聯系，與臨床一起進行整改[7]。
2.2 標本的信息核對
對于合格標本，標本前處理人員接收后對標本進行編號登記，將患者信息和標本信息錄入到病理數據庫管理系統。然后認真核對標本的送檢單信息與送檢標本屬性是否相符、核實患者姓名和病理號，確認無誤后進行標本取材，取材過程中詳細記錄標本的物理屬性特征、詳盡的取材部位、取材的標本數、裝盒數[8]。
2.3 標本的包埋固定、切片
及時良好的固定是制作一張優質切片的前提，固定液的選取以及固定液的量，固定的時間是固定的幾個重要因素。固定的好壞直接影響著特殊染色的結果。組織的脫水程序一般都是在機器中完成，要求實驗室對脫水機進行規范化的管理。設置好標準的脫水程序，及時更換脫水試劑，并且有相應的表格進行記錄。從脫水機出來后需進行蠟塊包埋與切片制作。包埋時要特別注意組織的包埋面，如包埋皮膚表面、腸黏膜、胃等具有組織方向的標本時，要注意使組織的方向一致，若不一致，易造成切片困難[9]。小組織要放在同一平面上，注意包埋時不要把纖維、布絲等包進組織中以免影響制片，損傷刀片。切片環節必須保證切面完整、無氣泡、無異物污染、厚薄一致、無刀痕、刮痕[10]。
3 染色中質量控制
3.1 染色溫度
在特殊染色中，溫度直接影響著染過程。特殊染色需要關注的溫度包括實驗室溫度、孵育箱溫度、試劑溫度。溫度升高，呈色及反應速度加快，反之減慢。實驗室溫度高，染色時間則相應縮短。一些在冰箱中保存的試劑，最好在染色前 10 min 取出待恢復室溫后進行染色。孵育箱溫度要按照染色步驟的孵育溫度準確設定，定期使用溫度計進行復查，當顯示溫度與實際溫度不符時要及時查找原因并糾正。
3.2 試劑濃度
新鮮試劑可以縮短染色時間。對于反復使用的試劑，要注意及時更換。四川大學華西醫院病理科所用的特殊染色試劑大部分為反復使用試劑，每染一步都要回收染料。多次反復使用后，試劑濃度被稀釋，在染色時就要適當延長染色時間，并根據染色效果及累積經驗及時更換。定期定時更換染液，保證染色的結果。
3.3 染色時間
染色時間一般包括媒染、浸染、分化等時間。特殊染色技術人員可根據試劑對組織的染色作用、溫度、切片厚薄、固定劑的類別和染液的新舊等因素進行調整，分化步驟應根據染液的濃度、溫度、浸染時間及分化液的性能來加以變更。分化掌握不好，會引起染色的不均、過淡或過深等現象。分化的過程中，宜在顯微鏡下觀察分化效果，以達到適當的分化結果[11]。
3.4 染液和緩沖液 pH 值
染液的 pH 值與染色的作用密切相關。配制試劑時需注意 pH 值的范圍。如幽門螺桿菌銀染色（warthin-starry stain，W-S 染色）所用染料需用 pH 值 4.0 的加酸水配制。部分易揮發的試劑敞口時間過長會導致 pH 值改變，如冰醋酸試劑敞口時間過長會導致 pH 值升高。而某些試劑敞口時間過長，空氣中的二氧化碳會溶解到試劑中，從而導致 pH 值降低。
3.5 試劑的配制、保存和更換
特殊染色技術人員對所有自配試劑都有表格進行詳細的記錄，記錄內容包括配制時間、名稱、濃度、量、有效期及配制人，完成后須將新舊試劑進行對照，以判斷新試劑質量是否與舊試劑一致。避光試劑必須使用棕色瓶保存，需冷藏試劑必須放置于 4～8℃ 冰箱內冷藏保存，切忌冷凍。瓶簽上應詳細標明試劑名稱（化學名或常用名），配制濃度及使用濃度、配制時間以及有效期（最好包括效期和開瓶后效期）[12]。各類試劑開瓶使用后應根據使用頻次進行定期更換，更換時間根據標本的頻次進行量化。有毒的廢棄試劑應倒入專用的廢液桶內回收或無毒無害化處理后排廢[12]。陰性和陽性對照質量控制，在染色操作過程中，應該采用已知含有和不含有待檢物質的標本進行陰性和陽性質量控制，以保證實驗使用方法的特異性和操作的準確性，如糖原染色的陰性對照片用淀粉酶消化處理[13]。
3.6 常見特殊染色的質量控制
3.6.1 抗酸染色
抗酸染色的切片厚度以 6 μL 為宜，漂片使用純凈蒸餾水，每天更換漂片機內的水，定期清潔。否則易滋生細菌，易出現假陽性。切片選擇打膠載玻片可避免在分化液分化過程中脫片。染色液苯酚和堿性品紅要分開保存，在開始染色時現按比例配制混合液，現配現用，用不完的液體直接棄去，混合后放置會影響染色效果。新鮮染色液可減少染料沉淀顆粒。配制的堿性品紅本身為飽和液，保存時間過長容易產生沉淀，所以在配制時盡量少量配制，時間過長也可以過濾后再使用。染色過程中主要注意分化的步驟，要充分分化使多余的紅色分化完為止，復染亞甲藍時間不易過長，2～3 s 即可，背景過深影響結果觀察。
3.6.2 糖原染色 (periodic acid-schiff stain，PAS)
PAS 染色中過碘酸染色時間為 10～15 min，氧化時室溫以 20℃ 為宜，配制好的過碘酸和 Schiff 液需用棕色試劑瓶保存在 4℃ 冰箱內，染色前提前取出試劑使其恢復室溫在進行染色。
3.6.3 網狀纖維染色
網狀纖維染色配制銀染色試劑要用雙蒸水，保證玻璃染缸的化學潔凈，完成銀染色之后直接用蒸餾水快速清洗切片，然后進行之后的還原步驟，如果用自來水清洗易導致染色失敗。
3.6.4 六胺銀染色
六胺銀染色必須使用潔凈的玻璃器皿，不然會影響染色結果。染液配制必須使用雙蒸水，這樣才能保證六胺銀工作液的純度，避免雜質沉淀影響觀察。放入 60℃ 烤箱進行染色時要嚴格控制染色時間，一般為 40～60 min，如果時間過長會使染色過度，導致染色失敗。在染色過程中可以通過顯微鏡觀察來掌握染色程度，在顯微鏡下觀察顏色不要太黑，至深棕褐色即可。復染之后，不能用自來水清洗，必須用蒸餾水清洗切片，否則在脫水過程中會造成復染的顏色嚴重脫色。
3.6.5 普魯士藍染色
染色液宜少量配制，不可久存，染液變淡黃色應丟棄。在染色時按比例混合兩種染液，混合后濾紙過濾后使用；必須使用潔凈的玻璃器皿進行染色；避免接觸金屬鐵制品和容器，防止假陽性結果。
3.6.6 剛果紅染色
剛果紅染色切片的厚度為 8～10 μL。把握好堿性酒精的分化是剛果紅染色的關鍵，分化不足導致背景紅色樣物質沉積染色過深，分化過度則色澤偏淺，出現假陰性結果。
3.6.7 W-S 染色
所有染液的配制都必須用 pH 值 4.0 的檸檬酸緩沖液配制。染色過程中顯影液需要新鮮配制，顯色時間控制在 5～15 min，顯微鏡下觀察組織顏色變棕黃色即終止顯色。顯色后要用 56℃ 熱水充分沖洗顯色液，避免顯色液中的明膠遇冷形成凝膠而出現顯色劑殘留。
4 染色后質量控制
染色完成后，特殊染色技術人員要在顯微鏡下觀察染色的結果。如果染色過淺，可以退回一步重新染色，染色過深，可在低濃度酒精中放置一會分化掉過染的顏色。最后進行脫水透明封片。在脫水過程中，注意及時更換無水乙醇及二甲苯，尤其是在夏季潮濕的季節，要注意片子從無水乙醇中出來后不能在空氣中停留太久，迅速放入二甲苯中，以防片子吸取空氣中的水氣導致脫水不徹底。封片過程中，封片的樹膠要稀稠得當，過稀、過稠都會影響封片質量，過稀封片時易干、起空泡，過稠時樹膠易溢出[14]。滴適量樹膠后蓋片時應輕拿蓋片延蓋玻片一側斜壓樹膠，這樣可防止產生氣泡。封固時要用力適當，避免樹膠溢出，否則易造成玻片表面不潔，影響觀察視野[15]。準確無誤地按標記貼好標簽。這樣一張完美的染色切片就做好了，但是質量控制流程并沒有結束。質量控制負責人應該定期將不同員工制作的切片進行比對和總結，確保不同技術人員之間技術的統一，總結不同員工操作的優秀經驗，改正自己的不足。
5 小結
質量控制體系涵蓋病理切片的各個環節，包括分析前、分析中和分析后各個環節。實驗室應該建立全面質量管理體系，既要涵蓋常規病理技術的質量控制內容，同時又包含特殊病理染色的特定內容。由于染色方法多樣，實驗室應該根據本實驗室開展的染色方法，建立每種染色方法的質量控制體系。要善于總結染色經驗：切片制作、試劑配制、染色溫濕度條件、緩沖液 pH 值、水的純凈度、反復使用試劑的使用次數等些許細小的差別，都會影響染色效果，質量控制體系要關注染色過程中各個環節；操作人員的操作經驗也是全面質量控制體系的一個關鍵因素。
綜上所述，特殊染色的質量控制對病理準確診斷具有直接影響。優質的切片必須要注意標本的信息核對、取材、組織塊的處理、切片，同時染色環節的規范操作也是切片制作質量控制關鍵環節之一[16]。病理技術全面質量控制除了上述講的技術方面的內容，還包括了實驗室規整制度的建立、人員的技術培訓以及實驗室的安全措施等。只有進行全面的質量控制，才能給正確的病理診斷提供有力的技術保障，為提高病理診斷的準確率提供優質的條件[15，17]。
質量控制是指為達到質量要求所采取的作業技術和活動的總稱。一張優質的切片是實現準確病理診斷的基礎和可靠保證，而質量控制則是實現這一目標的前提和必要條件[1-3]。建立病理技術的質量控制和質量保證體系，不僅是病理技術自身發展的需求，同時也是實驗室認可機構對病理實驗室發展的硬性要求[4]。目前，我國施行的醫學實驗室質量和能力認可準則（ISO 15189：2012）和美國病理學家協會（CAP）的認證體系均對病理技術的質量控制做了明確細致的要求[5-7]。
病理技術主要包括對病理樣本的收取、取材、制作、染色以及對病理資料的管理。特殊染色技術是病理技術的一個分支。特殊染色技術的質量控制與病理技術的質量控制有相似之處，但也具有其本身獨特的規律。按照病理標本工作流程的先后應分為染色前質量控制、染色中質量控制和染色后質量控制。本文將從以下幾個方面內容對特殊染色技術的全流程質量控制方法進行總結。
1 建立質量控制體系
進行病理技術的質量控制，質量控制負責人首先要建立一套完整的質量控制體系。根據質量控制體系的要求，建立相應的文件管理體系、實驗操作管理體系、實驗后質量控制體系等。文件管理體系對后續的操作管理體系和實驗后質量控制體系起指導作用[7]。
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文件管理體系包括質量方針、質量手冊、質量體系程序性文件和標準操作規程（standard operating procedures，SOP），以及與操作相關的各種記錄文件。
要實現質量控制目標，質量控制負責人首先要建立完整的管理文件體系。質量方針是實驗室的質量目標。質量手冊是實驗室實現質量目標，進行質量控制的綱領性文件；可對質量管理體系及其所用文件的框架進行描述，并對具體質量相關的操作提出明確質量要求。質量控制文件應包括技術程序在內的支持性程序和涉及質量管理的一般性文件，包括實驗室各項規章制度；概述質量管理體系文件的結構框架[7]。質量體系程序性文件是對質量手冊所規定的內容進行進一步拓展，是質量手冊的進一步擴展、延伸并細化。
實驗室要根據自身的發展目標、服務對象以及醫院的質量需求建立適合本實驗室的質量手冊和程序性文件，也就是“寫你所做的”。SOP 是依據質量手冊和程序性文件規定的內容而制定的用于指導病理技術實際操作的標準化操作指導文件。要求具體實用，簡單明了，具有統一性和可操作性。建立 SOP 文件，員工要嚴格遵守，規范操作。避免不同員工之間操作差異，甚至是錯誤操作而引起實驗誤差。最后，實驗室還應該建立完善的工作流程記錄，將各類實驗操作記錄下來，以便將來進行總結、備查、原始數據回溯。這不僅是實驗室自身工作的需求，同時也是為了降低醫療風險，解決醫療事故必不可少的“證據”。建立了完善的操作、記錄體系以后，實驗室還應該定期對各類操作記錄進行回顧總結，分析總結工作流程和效率，查漏補缺，總結經驗，以便進行下一步的質量改進[7]。
當建立了完善的質量管理體系后，實驗室管理人員和操作人員就應該按照質量管理體系的要求進行管理和操作。真正做到任何操作和制度都有規章可循，凡事都要按照標準化操作流程進行操作[7]。
2 染色前質量控制
染色前質量控制主要是從指組織采集到實驗室開始進行取材之前的質量控制。這往往是病理實驗室最容易忽視的環節。
2.1 標本接收
實驗室首先要明確規定接收標本的標準，對于不完全合格的標本進行區分，確定次優標本和不合格標本。次優標本在報告中應注明原因和可能對結果造成的影響。不合格標本應該拒收，并且對不合格標本產生較多的科室進行臨床聯系，與臨床一起進行整改[7]。
2.2 標本的信息核對
對于合格標本，標本前處理人員接收后對標本進行編號登記，將患者信息和標本信息錄入到病理數據庫管理系統。然后認真核對標本的送檢單信息與送檢標本屬性是否相符、核實患者姓名和病理號，確認無誤后進行標本取材，取材過程中詳細記錄標本的物理屬性特征、詳盡的取材部位、取材的標本數、裝盒數[8]。
2.3 標本的包埋固定、切片
及時良好的固定是制作一張優質切片的前提，固定液的選取以及固定液的量，固定的時間是固定的幾個重要因素。固定的好壞直接影響著特殊染色的結果。組織的脫水程序一般都是在機器中完成，要求實驗室對脫水機進行規范化的管理。設置好標準的脫水程序，及時更換脫水試劑，并且有相應的表格進行記錄。從脫水機出來后需進行蠟塊包埋與切片制作。包埋時要特別注意組織的包埋面，如包埋皮膚表面、腸黏膜、胃等具有組織方向的標本時，要注意使組織的方向一致，若不一致，易造成切片困難[9]。小組織要放在同一平面上，注意包埋時不要把纖維、布絲等包進組織中以免影響制片，損傷刀片。切片環節必須保證切面完整、無氣泡、無異物污染、厚薄一致、無刀痕、刮痕[10]。
3 染色中質量控制
3.1 染色溫度
在特殊染色中，溫度直接影響著染過程。特殊染色需要關注的溫度包括實驗室溫度、孵育箱溫度、試劑溫度。溫度升高，呈色及反應速度加快，反之減慢。實驗室溫度高，染色時間則相應縮短。一些在冰箱中保存的試劑，最好在染色前 10 min 取出待恢復室溫后進行染色。孵育箱溫度要按照染色步驟的孵育溫度準確設定，定期使用溫度計進行復查，當顯示溫度與實際溫度不符時要及時查找原因并糾正。
3.2 試劑濃度
新鮮試劑可以縮短染色時間。對于反復使用的試劑，要注意及時更換。四川大學華西醫院病理科所用的特殊染色試劑大部分為反復使用試劑，每染一步都要回收染料。多次反復使用后，試劑濃度被稀釋，在染色時就要適當延長染色時間，并根據染色效果及累積經驗及時更換。定期定時更換染液，保證染色的結果。
3.3 染色時間
染色時間一般包括媒染、浸染、分化等時間。特殊染色技術人員可根據試劑對組織的染色作用、溫度、切片厚薄、固定劑的類別和染液的新舊等因素進行調整，分化步驟應根據染液的濃度、溫度、浸染時間及分化液的性能來加以變更。分化掌握不好，會引起染色的不均、過淡或過深等現象。分化的過程中，宜在顯微鏡下觀察分化效果，以達到適當的分化結果[11]。
3.4 染液和緩沖液 pH 值
染液的 pH 值與染色的作用密切相關。配制試劑時需注意 pH 值的范圍。如幽門螺桿菌銀染色（warthin-starry stain，W-S 染色）所用染料需用 pH 值 4.0 的加酸水配制。部分易揮發的試劑敞口時間過長會導致 pH 值改變，如冰醋酸試劑敞口時間過長會導致 pH 值升高。而某些試劑敞口時間過長，空氣中的二氧化碳會溶解到試劑中，從而導致 pH 值降低。
3.5 試劑的配制、保存和更換
特殊染色技術人員對所有自配試劑都有表格進行詳細的記錄，記錄內容包括配制時間、名稱、濃度、量、有效期及配制人，完成后須將新舊試劑進行對照，以判斷新試劑質量是否與舊試劑一致。避光試劑必須使用棕色瓶保存，需冷藏試劑必須放置于 4～8℃ 冰箱內冷藏保存，切忌冷凍。瓶簽上應詳細標明試劑名稱（化學名或常用名），配制濃度及使用濃度、配制時間以及有效期（最好包括效期和開瓶后效期）[12]。各類試劑開瓶使用后應根據使用頻次進行定期更換，更換時間根據標本的頻次進行量化。有毒的廢棄試劑應倒入專用的廢液桶內回收或無毒無害化處理后排廢[12]。陰性和陽性對照質量控制，在染色操作過程中，應該采用已知含有和不含有待檢物質的標本進行陰性和陽性質量控制，以保證實驗使用方法的特異性和操作的準確性，如糖原染色的陰性對照片用淀粉酶消化處理[13]。
3.6 常見特殊染色的質量控制
3.6.1 抗酸染色
抗酸染色的切片厚度以 6 μL 為宜，漂片使用純凈蒸餾水，每天更換漂片機內的水，定期清潔。否則易滋生細菌，易出現假陽性。切片選擇打膠載玻片可避免在分化液分化過程中脫片。染色液苯酚和堿性品紅要分開保存，在開始染色時現按比例配制混合液，現配現用，用不完的液體直接棄去，混合后放置會影響染色效果。新鮮染色液可減少染料沉淀顆粒。配制的堿性品紅本身為飽和液，保存時間過長容易產生沉淀，所以在配制時盡量少量配制，時間過長也可以過濾后再使用。染色過程中主要注意分化的步驟，要充分分化使多余的紅色分化完為止，復染亞甲藍時間不易過長，2～3 s 即可，背景過深影響結果觀察。
3.6.2 糖原染色 (periodic acid-schiff stain，PAS)
PAS 染色中過碘酸染色時間為 10～15 min，氧化時室溫以 20℃ 為宜，配制好的過碘酸和 Schiff 液需用棕色試劑瓶保存在 4℃ 冰箱內，染色前提前取出試劑使其恢復室溫在進行染色。
3.6.3 網狀纖維染色
網狀纖維染色配制銀染色試劑要用雙蒸水，保證玻璃染缸的化學潔凈，完成銀染色之后直接用蒸餾水快速清洗切片，然后進行之后的還原步驟，如果用自來水清洗易導致染色失敗。
3.6.4 六胺銀染色
六胺銀染色必須使用潔凈的玻璃器皿，不然會影響染色結果。染液配制必須使用雙蒸水，這樣才能保證六胺銀工作液的純度，避免雜質沉淀影響觀察。放入 60℃ 烤箱進行染色時要嚴格控制染色時間，一般為 40～60 min，如果時間過長會使染色過度，導致染色失敗。在染色過程中可以通過顯微鏡觀察來掌握染色程度，在顯微鏡下觀察顏色不要太黑，至深棕褐色即可。復染之后，不能用自來水清洗，必須用蒸餾水清洗切片，否則在脫水過程中會造成復染的顏色嚴重脫色。
3.6.5 普魯士藍染色
染色液宜少量配制，不可久存，染液變淡黃色應丟棄。在染色時按比例混合兩種染液，混合后濾紙過濾后使用；必須使用潔凈的玻璃器皿進行染色；避免接觸金屬鐵制品和容器，防止假陽性結果。
3.6.6 剛果紅染色
剛果紅染色切片的厚度為 8～10 μL。把握好堿性酒精的分化是剛果紅染色的關鍵，分化不足導致背景紅色樣物質沉積染色過深，分化過度則色澤偏淺，出現假陰性結果。
3.6.7 W-S 染色
所有染液的配制都必須用 pH 值 4.0 的檸檬酸緩沖液配制。染色過程中顯影液需要新鮮配制，顯色時間控制在 5～15 min，顯微鏡下觀察組織顏色變棕黃色即終止顯色。顯色后要用 56℃ 熱水充分沖洗顯色液，避免顯色液中的明膠遇冷形成凝膠而出現顯色劑殘留。
4 染色后質量控制
染色完成后，特殊染色技術人員要在顯微鏡下觀察染色的結果。如果染色過淺，可以退回一步重新染色，染色過深，可在低濃度酒精中放置一會分化掉過染的顏色。最后進行脫水透明封片。在脫水過程中，注意及時更換無水乙醇及二甲苯，尤其是在夏季潮濕的季節，要注意片子從無水乙醇中出來后不能在空氣中停留太久，迅速放入二甲苯中，以防片子吸取空氣中的水氣導致脫水不徹底。封片過程中，封片的樹膠要稀稠得當，過稀、過稠都會影響封片質量，過稀封片時易干、起空泡，過稠時樹膠易溢出[14]。滴適量樹膠后蓋片時應輕拿蓋片延蓋玻片一側斜壓樹膠，這樣可防止產生氣泡。封固時要用力適當，避免樹膠溢出，否則易造成玻片表面不潔，影響觀察視野[15]。準確無誤地按標記貼好標簽。這樣一張完美的染色切片就做好了，但是質量控制流程并沒有結束。質量控制負責人應該定期將不同員工制作的切片進行比對和總結，確保不同技術人員之間技術的統一，總結不同員工操作的優秀經驗，改正自己的不足。
5 小結
質量控制體系涵蓋病理切片的各個環節，包括分析前、分析中和分析后各個環節。實驗室應該建立全面質量管理體系，既要涵蓋常規病理技術的質量控制內容，同時又包含特殊病理染色的特定內容。由于染色方法多樣，實驗室應該根據本實驗室開展的染色方法，建立每種染色方法的質量控制體系。要善于總結染色經驗：切片制作、試劑配制、染色溫濕度條件、緩沖液 pH 值、水的純凈度、反復使用試劑的使用次數等些許細小的差別，都會影響染色效果，質量控制體系要關注染色過程中各個環節；操作人員的操作經驗也是全面質量控制體系的一個關鍵因素。
綜上所述，特殊染色的質量控制對病理準確診斷具有直接影響。優質的切片必須要注意標本的信息核對、取材、組織塊的處理、切片，同時染色環節的規范操作也是切片制作質量控制關鍵環節之一[16]。病理技術全面質量控制除了上述講的技術方面的內容，還包括了實驗室規整制度的建立、人員的技術培訓以及實驗室的安全措施等。只有進行全面的質量控制，才能給正確的病理診斷提供有力的技術保障，為提高病理診斷的準確率提供優質的條件[15，17]。