目的 BMSCs 具有多向分化潛能,在不同培養條件下能夠向多種細胞分化,但年齡對BMSCs 分化的影響尚不明確。探討雪旺細胞(Schwann cells,SCs)形成的體外微環境對不同年齡大鼠BMSCs 向神經元和少突膠質細胞分化的影響。 方法 從幼年(1 月齡)Wistar 大鼠預變性坐骨神經中分離純化SCs,從幼年(1 月齡)、成年(6 月齡)、老年(12 月齡)Wistar 大鼠骨髓中提取BMSCs,均行免疫熒光鑒定。將第3 代SCs 與PKH26 標記的第2 代BMSCs 在雙層培養皿內等體積、等密度共培養,根據BMSCs 來源不同將實驗分為3 組:A、B、C 組SCs 分別與幼年(1 月齡)、成年(6 月齡)、老年(12 月齡)大鼠BMSCs 共培養。倒置相差顯微鏡下觀察分化過程中BMSCs 形態變化,免疫熒光染色檢測共培養后第7 天BMSCs 分化表達神經特異性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)和磷脂堿性蛋白(myelin basic protein,MBP)的情況,ELISA 法檢測各組細胞共培養0、3、6、9、12 d 培養液上清神經調節蛋白1(neuregulin 1,NRG1)
的表達。 結果 實驗成功分離并培養SCs 和 BMSCs,免疫熒光鑒定SCs 呈S-100 陽性表達,BMSCs 呈CD29 陽性表達、CD44 陽性表達、CD90 陽性表達。細胞共培養第7 天倒置相差顯微鏡觀察示,A 組BMSCs 胞體回縮,呈圓形或錐形,并帶有突起,形態類似神經組織細胞;B、C 組大部分BMSCs 形態無明顯改變。細胞共培養第7 天免疫熒光染色示,A、B、C 組BMSCs 的NSE 陽性表達率分別為22.39% ± 2.86%、12.89% ± 1.78% 和2.69% ± 0.80%,MBP 陽性表達率分別為16.13% ± 2.39%、6.33% ± 1.40% 和0.92% ± 0.17%,各組間NSE 陽性表達率和MBP 陽性表達率比較差異均有統計學意義(P lt; 0.05)。ELISA 法檢測示,A 組細胞培養液上清中NRG1 含量于細胞共培養后逐漸增多,且呈時間依賴性增加;細胞共培養6、9、12 d,A 組NRG1 含量高于B、C 組,B 組高于C 組,比較差異均有統計學意義(P lt; 0.05)。 結論 不同年齡大鼠BMSCs 與SCs 共培養均可向神經元和少突膠質細胞分化,但分化能力隨年齡增加而降低,SCs 分泌的多種生長因子可能是誘導BMSCs 分化的重要因素。
引用本文: 趙富生,武庚,武楊,金秀東,張際緋. 雪旺細胞對不同年齡大鼠BMSCs 分化的影響. 中國修復重建外科雜志, 2011, 25(2): 160-165. doi: 復制