• 1 天津中醫藥大學第一附屬醫院腦外科(天津,300193);;
  • 2 天津醫科大學總醫院骨科;
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目的 觀察大鼠臍帶華通膠來源MSCs(umbilical cord MSCs,UCMSCs)體外培養特性及其對大鼠脊髓損傷(spinal cord injury,SCI)后神經再生的作用。 方法 取足天Wistar 孕鼠臍帶分離、培養UCMSCs,體外擴增并采用流式細胞儀鑒定。細胞移植前1 d 取第5 代細胞以Hoechst 33258 染液標記,調整終濃度為1 × 105 個/μL 備用。另取成年雌性Wistar 大鼠60 只,體重(300 ± 10)g,隨機分為3 組,每組20 只。A、B 組以Impactor model- Ⅱ型打擊器制備大鼠T10 SCI 模型,并分別于損傷區注射1 μL 標記后的細胞懸液和等量DMEM 培養液;C 組行單純椎板減壓,不予脊髓打擊及治療措施。于術后1 d,1、2、3、4、5、6 周,采用BBB評分法行肢體功能評分;術后6 周行神經絲蛋白200(neurofilament 200,NF-200)免疫組織化學染色觀察細胞分化情況;術后10 周行生物素葡聚糖胺(biotinylated dextran amine,BDA)順行示蹤觀察皮質脊髓束(corticospinal tract,CST)再生情況。 結果 培養的UCMSCs 為梭形細胞,呈漩渦狀或平行貼壁生長。流式細胞儀檢測顯示,UCMSCs 表達CD29,不表達CD31、CD45 及HLA-DR。術后A、B 組BBB 評分均明顯上升,3 周后A 組BBB 評分明顯高于B 組,差異有統計學意義(P  lt; 0.05);各時間點A、B 組評分均低于C 組(P  lt; 0.05)。術后6 周,熒光顯微鏡觀察可見Hoechst 33258 染液標記的UCMSCs 存活并向損傷區聚集;A、C 組NF-200 免疫熒光染色陽性面積分別為(11 943 ± 856)像素及(13 117 ± 945)像素,明顯高于B 組的(7 986 ± 627)像素,差異有統計學意義(P  lt; 0.05);A、 C 組差異無統計學意義(P  gt; 0.05)。BDA 順行神經示蹤觀察顯示,術后10 周A 組部分CST 再生神經纖維可延伸至損傷區遠端;B 組神經纖維極少通過損傷空洞;C 組CST 纖維在對側脊髓白質后索中行走。A、B 組各點再生軸突數與T5橫斷面陽性染色軸突百分比與C 組比較,差異均有統計學意義(P  lt; 0.05)。 結論 UCMSCs 能在體外快速增殖,移植后在大鼠SCI 部位存活并向神經細胞分化,可有效促進SCI 后運動功能恢復和神經軸突再生。

引用本文: 朱玉海,馮世慶,王雪. 大鼠臍帶華通膠來源MSCs 修復脊髓損傷的實驗研究. 中國修復重建外科雜志, 2009, 23(12): 1491-1496. doi: 復制