目的 確定SP1誘騙性寡核苷酸(Decoy Oligodeoxynucleotides，ODNs）在Oligofectamine介導下轉染豬血管內皮細胞系SV-40-PED的最佳轉染條件和效果。方法 以SV-40-PED為轉染對象，在6孔培養板中,接種SV-40-PED細胞2×105/孔，將4 μl Oligofectamine和不同濃度的SP1 ODNs(2.5、5.0、7.5、10.0和12.5 μl)分別溶于100 μl無血清、無抗生素的DMEM培養基，室溫放置20min后轉染細胞，SP1 ODNs最終濃度分別為50、100、150、200和250 nmol/L、轉染26 h檢測不同濃度轉染情況，確定最佳SP1 ODNs與Oligofectamine的比率、轉染時間；流式細胞儀檢測細胞內的相對熒光強度及攝取率評價轉染效率；熒光顯微鏡觀察細胞內熒光分布；測定細胞上清乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase, LDH)含量，觀察細胞損傷情況。結果〓SV-40-PED在Oligofectamine的介導下可以攝取SP1 ODNs。SP1 ODNs終濃度為50、100、150 nmol/L 組細胞形態無明顯變化，終濃度為200、250 nmol/L組細胞收縮、變圓后逐漸恢復；SP1 ODNs終濃度為250 nmol/L時, 轉染26 h時細胞形態也無明顯變化,48、72 h時有細胞漂浮現象。熒光下觀察,轉染成功各組熒光物質分布于細胞核內,其中SP1 ODNs終濃度為200、250nmol/L組可見清晰核仁，濃度越高，熒光強度越強，細胞內熒光物質主要聚集于細胞核。SP1 ODNs終濃度為250 nmol/L時，轉染72 h組LDH濃度為137.12±3.92 U/L，顯著高于26 h的49.61±17.13 U/L和48 h的120.26±8.42 U/L，均有統計學意義(P lt;0.01)；當轉染時間為26 h時，各濃度組上清液LDH值差異無統計學意義（P gt;0.05）。結論SP1 ODNs終濃度為250 nmol/L、轉染26h時可以為SV-40-PED轉染提供良好效果。

引用本文： 黃亞冰,徐婧,陳松,謝林,王璐,尹注增,左利群,陳實. Oligofectamine介導轉錄因子SP1誘騙性寡核苷酸轉染豬內皮細胞系條件的優化研究. 中國修復重建外科雜志, 2007, 21(8): 877-881. doi: 復制