目的將軟骨細胞復合于人臍帶Wharton膠取向支架，體外評估該支架對軟骨細胞的影響和作用。 方法取成年新西蘭大白兔肩關節軟骨組織分離培養軟骨細胞。取正常新生兒臍帶組織，通過濕潤粉碎結合化學脫細胞技術脫細胞，利用冷凍干燥及交聯等技術制備人臍帶Wharton膠取向支架。取第2代軟骨細胞與人臍帶Wharton膠取向支架復合培養，倒置顯微鏡、掃描電鏡觀察細胞在支架上分布及黏附情況；甲苯胺藍、番紅O染色觀察細胞細胞外基質分泌情況；二乙酰熒光素-碘化丙啶雙色熒光檢測法染色及Hoechst33258染色評估細胞在支架上的活力及增殖情況；將體外PKH26熒光標記的軟骨細胞與支架復合培養，熒光顯微鏡觀察。 結果倒置顯微鏡觀察示，培養3 d細胞在支架孔隙內分布較均勻，呈圓形或橢圓形；掃描電鏡觀察示，培養7 d大量細胞黏附于支架孔隙間，呈圓形或橢圓形，且細胞沿取向孔道伸展排列，相互聚集，增殖旺盛；組織學觀察示，培養7 d，細胞在支架中分布均勻且增殖旺盛，細胞分泌大量細胞外基質，取向支架能引導細胞遷徙和增殖，并能有效保留和促進細胞外基質分泌；細胞活力評估結果示，培養3 d見支架上黏附的大部分細胞為活細胞，細胞成活率高達90%以上。熒光顯微鏡觀察示，熒光標記細胞與支架復合培養1 d，細胞在支架內部均勻分布，增殖旺盛。 結論人臍帶Wharton膠取向支架具有良好的親和性和細胞相容性，有利于軟骨細胞黏附和增殖，細胞存活率高，是一種比較理想的軟骨組織工程支架材料。
目的探討脫細胞軟骨細胞外基質（acellular cartilage extracellular matrix, ACECM）取向支架復合軟骨細胞構建組織工程軟骨的可行性。方法取市售豬關節軟骨組織，分離培養關節軟骨細胞并傳代。取第 3 代軟骨細胞行 PKH26 熒光標記，MTT 檢測標記對細胞增殖無影響后，分別取標記及未標記的軟骨細胞復合 ACECM 取向支架并體外培養后，大體觀察支架形態，倒置顯微鏡、熒光顯微鏡觀察軟骨細胞在支架中的黏附、生長和分布情況，掃描電鏡觀察支架中細胞形態，Ⅱ型膠原免疫熒光染色觀察軟骨細胞外基質分泌情況。將 PKH26 標記的軟骨細胞-支架復合物植入裸鼠背部皮下腔隙，術后觀察裸鼠一般情況，4 周后分子熒光活體成像系統無創傷性評估細胞-支架復合物生長情況，取材行大體觀察以及番紅 O、甲苯胺藍、Ⅱ型膠原免疫組織化學染色觀察，評價形成軟骨組織的能力。結果細胞-支架復合物體外培養 7 d，大體觀察呈半透明并具有一定硬度；倒置顯微鏡和熒光顯微鏡觀察軟骨細胞在支架上能良好黏附生長，并沿支架管道方向生長，分泌Ⅱ型膠原。細胞-支架復合物植入裸鼠皮下后，分子熒光活體成像系統觀察示細胞均存活；術后 4 周，大體觀察見復合物呈類軟骨樣組織，組織學染色及Ⅱ型膠原免疫組織化學染色示細胞周圍軟骨細胞外基質分泌，可見“陷窩”樣結構形成。結論ACECM 取向支架有利于軟骨細胞的黏附、增殖及取向性分布類似于正常軟骨結構，并在裸鼠皮下成功異位構建組織工程軟骨。