目的觀察探討音猬因子(Shh)信號轉導通路在缺氧誘導的人視網膜色素上皮(hRPE)細胞血管內皮生長因子(VEGF)表達中的作用。 方法hRPE-19細胞分為正常對照組(Cont組)、缺氧組。缺氧組加入100 μmol/L CoCl2再分為缺氧對照組(CoCl2組)、cyclopamine處理組(CYA組)、二甲基亞砜對照組(DMSO組)。CYA組于造成缺氧前1 h加入20 μmol/L的cyclopamine進行預處理; DMSO組加入1‰DMSO。各組細胞培養4、8、12、24 h。采用熒光定量PCR(RT-PCR)檢測細胞內Shh、VEGF mRNA的表達; 酶聯免疫吸附測定試驗(ELISA)檢測細胞培養上清液中VEGF蛋白含量。 結果RT-PCT檢測結果顯示, 缺氧刺激4、8、12、24 h, 缺氧組細胞內Shh、VEGF mRNA表達逐漸增高, 與Cont組細胞內Shh(F=45.260)、VEGF mRNA(F=264.938)表達比較, 差異有統計學意義(P=0.001)。CYA組細胞內Shh、VEGF mRNA表達與CoCl2組比較, 差異均有統計學意義(P＜0.01);DMSO組細胞內Shh、VEGF mRNA表達與CoCl2組比較, 差異均無統計學意義(P＞0.05)。ELISA檢測結果顯示, CoCl2組細胞培養上清液中VEGF蛋白含量與Cont組比較, 差異有統計學意義(F=3 156.676, P=0.001)。CYA組細胞培養上清液中VEGF蛋白含量較CoCl2組明顯降低, 差異均有統計學意義(P＜0.01)。 結論Shh信號轉導通路可能參與了缺氧引起的hRPE細胞中VEGF的表達。
目的 觀察缺氧狀態下人視網膜色素上皮（hRPE）細胞中音猥因子（Shh）與血管內皮生長因子（VEGF）表達的關系。 方法 傳代培養hRPE細胞，取對數生長期3～6代細胞用于實驗。將hRPE細胞分為正常對照組、缺氧實驗組及環巴明抑制組。缺氧實驗組加入100 μmol/L CoCl2，環巴明抑制組于制作缺氧狀態前1 h加入20 μmol/L的環巴明進行預處理。3組細胞培養4、8、12、24 h。采用熒光定量聚合酶鏈反應檢測3組hRPE細胞中Shh、VEGF mRNA表達。采用酶聯免疫吸附法檢測正常對照組、缺氧實驗組細胞培養上清液中Shh、VEGF蛋白表達。采用Pearson相關性分析法分析缺氧實驗組hRPE細胞中Shh、VEGF mRNA表達與蛋白表達之間的關系。 結果 正常對照組可見少量Shh、VEGF mRNA及蛋白表達。缺氧實驗組Shh、VEGF mRNA及蛋白表達較正常對照組明顯增加，差異有統計學意義（F=178.364、183.732、77.456、91.572，P＜0.01）。環巴明抑制組Shh、VEGF mRNA表達較缺氧實驗組明顯降低，差異有統計學意義（F=68.745、121.834，P＜0.01）。相關性分析結果顯示，缺氧實驗組hRPE細胞中Shh蛋白表達與VEGF蛋白表達呈正相關（r=0.942，P＜0.05）；Shh mRNA表達與VEGF mRNA表達呈正相關（r=0.970，P＜0.01）。環巴明抑制組hRPE細胞中Shh mRNA表達與VEGF mRNA表達無相關性（r=0.915，P＞0.05）。 結論 缺氧狀態下hRPE細胞中Shh與VEGF表達呈正相關。
目的通過比較TNF-α誘導滑膜MSCs（synovium-derived MSCs，SMSCs）與BMSCs凋亡，探討SMSCs的抗凋亡能力。 方法取患者自愿捐贈的滑膜組織及骨髓，分別采用組織貼壁法和密度梯度離心法分離培養SMSCs和BMSCs并傳代，取第3～5代細胞行細胞免疫表型及三系分化鑒定后進行實驗。實驗分為4組，其中SMSCs、BMSCs凋亡誘導組（SMSCs、BMSCs實驗組）用20 ng/mL TNF-α和10 μg/mL放線菌酮對細胞進行凋亡誘導，其對應對照組以正常培養基培養。倒置相差顯微鏡下觀察凋亡誘導細胞形態變化；培養24 h取各組細胞，采用細胞計數試劑盒8及流式細胞術檢測細胞存活率及凋亡率，Western blot法檢測細胞半胱氨酶天冬氨酶蛋白酶降解產物8、3（Cleaved Caspase-8、3）的表達。 結果經細胞表型及三系分化鑒定培養獲得的細胞均符合MSCs鑒定標準。倒置相差顯微鏡觀察示，隨凋亡誘導培養時間延長，兩實驗組細胞形態及生長均較對應的對照組差。培養24 h，兩對照組細胞存活率均為100%，未見細胞凋亡；SMSCs、BMSCs實驗組細胞存活率分別降至60.13%±8.63%及46.55%±10.54%，均顯著低于對照組（P＜0.05），SMSCs實驗組細胞存活率顯著高于BMSCs實驗組（t=3.152，P=0.006）。SMSCs和BMSCs對照組細胞凋亡率分別為1.12%±0.24%和1.35%±0.31%，兩實驗組分別增高至36.54%±8.63%及53.77%±11.52%，均顯著高于對照組（P＜0.05），且SMSCs實驗組細胞凋亡率顯著低于BMSCs實驗組（t=3.785，P=0.001）。兩對照組細胞Cleaved Caspase-8、3蛋白幾乎不表達，且SMSCs實驗組和BMSCs組細胞Cleaved Caspase-8、3蛋白明顯高表達；其中BMSCs實驗組明顯高于SMSCs實驗組（t=13.870，P=0.000；t=7.309，P=0.000）。 結論經TNF-α誘導培養，SMSCs凋亡明顯少于BMSCs，具有更強的抗凋亡能力。