共聚焦激光顯微內鏡技術可以實時、原位獲取細胞級圖像，能夠輔助醫生術中實時診斷，但是其無創性給重新定位光學活檢部位帶來了困難。共聚焦探針定位算法可以自動計算探針尖端坐標，即光學活檢部位坐標。本文提出了一種基于區域生長和內窺鏡尺寸先驗的共聚焦探針定位算法，該算法在探針邊緣圖像上通過區域生長檢測探針區域，隨后基于給定的探針軸線搜索尖端點，并迭代優化。最后基于探針單自由度運動特點，利用內窺鏡的尺寸先驗信息計算出探針尖端點的三維坐標，解決了單目相機的尺度不確定問題。在本文采集到的數據集上對共聚焦探針定位算法進行測試，結果表明，該算法不再依賴于探針的顏色信息，避免了光照不均勻對探針像素灰度值的影響，具有較魯棒的定位精度和運行速度。在探針伸出內窺鏡0～5 cm的長度范圍內，像素誤差最低可達11.76像素，平均相對位置誤差最低可達1.66 mm，能夠實時、準確地實現共聚焦探針的定位。