目的探討可磷酸化短肽（phosphorylatable short peptide，pSP）偶聯殼聚糖（chitosan，CS）（pSP-CS），攜載IGF-1和IL-1受體拮抗劑（IL-1 receptor antagonist，IL-1Ra）基因，局部轉染促進關節軟骨損傷修復的作用。 方法構建pBudCE4.1-IL-1Ra、pBudCE4.1-IGF-1及pBudCE4.1-IL-1Ra+IGF-1質粒，以pSP偶聯CS形成pSP-CS，將以上重組質粒分別與其復合形成pSP-CS/質粒DNA（pDNA）復合物。取3月齡健康雄性新西蘭大耳白兔30只，體重2.0～2.5 kg，雙側后肢隨機分為5組（n=12）。假手術組（A組）僅暴露股骨外側髁關節面，pSP-CS/pBudCE4.1干預組（B組）、pSP-CS/pBudCE4.1-IL-1Ra干預組（C組）、pSP-CS/pBudCE4.1-IGF-1干預組（D組）、pSP-CS/pBudCE4.1-IL-1Ra+IGF-1干預組（E組）制備膝關節外側髁軟骨缺損模型。術后1周，各干預組給予對應pSP-CS/pDNA復合物，共7周；A組注射等量生理鹽水。術后觀察動物一般情況，8周時處死實驗動物，取關節腔灌洗液ELISA分析IL-1Ra及IGF-1含量；實時熒光定量PCR檢測缺損區軟骨組織聚集蛋白聚糖（Aggrecan）、基質金屬蛋白酶3（matrix metalloproteinase 3，MMP-3）、MMP抑制劑1（MMP inhibitor 1，TIMP-1）mRNA表達；阿爾辛藍-過碘酸雪夫（alcian blue-periodic acid/schiff，ABPAS）染色及Aggrecan免疫組織化學染色鑒定損傷區新生細胞的軟骨細胞表型，分析Aggrecan染色吸光度（A）值。 結果實驗動物術后無感染及死亡。各干預組關節腔灌洗液中檢測到大量外源蛋白IGF-1和IL-1Ra，其中D、E組IGF-1含量以及C、E組IL-1Ra含量顯著高于A組（P＜0.05）。E組Aggrecan和TIMP-1 mRNA表達上調，MMP-3 mRNA表達下調，明顯優于C、D組（P＜0.05）。C、D、E組缺損處出現不同程度軟骨性修復，AB-PAS染色及Aggrecan免疫組織化學染色均為陽性，且E組作用明顯優于C、D組（P＜0.05）；B組缺損處僅被大量纖維組織增生和炎性細胞浸潤，未見明顯軟骨性修復。 結論pSP-CS是一種較理想的基因載體，可攜載治療基因有效進入兔關節軟骨組織；IL-1Ra與IGF-1協同作用明顯促進損傷軟骨修復。
目的 探討核定位信號肽偶聯核激酶底物短肽（nucleus localization signal linked nucleic kinase substrate short peptide，NNS）修飾殼聚糖（chitosan，CS）（NNSCS），介導人微小 RNA-140（microRNA-140，miR-140）基因轉染，對體外培養的兔關節軟骨細胞的作用。 方法 將重組質粒 GV268-miR-140 和空質粒 GV268 分別與 NNSCS 復合形成 NNSCS/pDNA 納米復合物。取新生新西蘭大耳白兔膝關節軟骨，采用胰蛋白酶和膠原酶聯合消化法分離培養原代軟骨細胞。取第 2 代軟骨細胞分為 3 組：正常細胞對照組（A 組）、NNSCS/GV268 空質粒轉染組（B 組）、NNSCS/GV268-miR-140 轉染組（C 組），B、C 組細胞分別以 NNSCS/GV268 及 NNSCS/GV268-miR-140 納米復合物瞬時轉染。轉染后，實時熒光定量 PCR（real-time fluorescent quantitative PCR，RT-qPCR）檢測外源 miR-140 的表達；Annexin Ⅴ-FITC/PI 雙染色法及 MTT 法分別檢測外源 miR-140 對軟骨細胞凋亡及增殖活力的影響；RT-qPCR 檢測軟骨細胞中 Sox9、聚集蛋白聚糖（Aggrecan）、組蛋白去乙酰化酶 4 （histone deacetylase 4，Hdac4）基因表達。 結果 RT-qPCR 檢測示，C 組外源 miR-140 表達水平較 A、B 組明顯上調（P<0.05）。與 A、B 組比較，C 組軟骨細胞凋亡率明顯降低，細胞增殖活力明顯增加，細胞內 Sox9、Aggrecan 基因相對表達量明顯上調、Hdac4 基因相對表達量明顯下調（P<0.05）；A、B 組間以上指標比較，差異均無統計學意義（P>0.05）。 結論 NNSCS 可攜帶外源基因進入軟骨細胞并高效表達，高表達的 miR-140 能提高體外培養軟骨細胞的生物活性，為其用于治療軟骨損傷性疾病提供了實驗依據。