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凍存對人臍血間充質干細胞生物學特性的影響

目的 觀察凍存復蘇對人臍血(human umbilical cord blood)間充質干細胞(mesenchymal stem cells, MSCs)生物學特性的影響.方法 體外分離、培養人臍血MSCs,傳代后,將第3代的MSCs加入含10%二甲基亞砜(DMSO)和90%胎牛血清的細胞凍存液中,－196 ℃液氮保存4周,觀察比較凍存前及凍存復蘇后MSCs的形態、增殖及多向分化能力.結果 凍存前及凍存復蘇后,MSCs形態無明顯差別,均呈典型的梭形,MSCs貼壁生長; MSCs生長曲線相似,凍存復蘇后的細胞生長曲線略有下降,但差異無統計學意義(Pgt;0.05); MSCs經脂肪誘導液誘導2周后,細胞漿中出現脂肪細胞所特有的脂肪滴,經0.5% 油紅O染色,脂肪滴染為紅色,說明MSCs有向脂肪細胞分化的能力; MSCs經成骨誘導液誘導4周后,Von Kossa染色可見黑色的礦化結節沉積,鈣結節的形成為成骨細胞特有,說明MSCs有向成骨細胞分化的能力.提示凍存復蘇后MSCs經誘導仍然可以向脂肪細胞和成骨細胞分化,與凍存前無明顯差異.結論 人臍血MSCs經凍存復蘇后,其生物學特性可獲良好保持.

胃癌病理學與生物學特征的關系

膽道梗阻時膽囊及膽管膽汁流動特性比較

采用犬膽總管梗阻模型，觀察膽道梗阻后不同時期膽囊膽汁及膽管膽汁流動特性的變化。結果：正常犬膽囊膽汁及膽管膽汁的流動符合Casson流動；膽道梗阻后，隨膽道梗阻時間延長，膽囊及膽管膽汁保持Casson流動，膽管膽汁的屈服值及高、低切變率下表現粘度變化均類似于膽囊膽汁。

染料介導光氧化處理去細胞牛頸靜脈帶瓣管道的生物學特性

目的 評價染料介導光氧化處理去細胞牛頸靜脈帶瓣管道的生物學特性。 方法 2009年7月至2010年7月，第四軍醫大學西京醫院采用不同方法處理牛頸靜脈帶瓣管道，選用年齡2~6歲、體重200~400 kg秦川黃牛的牛頸靜脈帶瓣管道40根，按隨機數字表法分為4組，每組10根。戊二醛處理組(GA組)：用戊二醛處理牛頸靜脈帶瓣管道；去細胞處理組（DC組）：將牛頸靜脈帶瓣管道進行去細胞處理；去細胞+染料介導光氧化聯合處理組（DP組）：將牛頸靜脈帶瓣管道進行去細胞+染料介導光氧化聯合處理；對照組（CO組）：不作固定處理。比較4組牛頸靜脈帶瓣管道管壁的大體形態、組織學特點、瓣膜厚度、組織含水量、熱皺縮溫度和斷裂強度，并測定可溶性蛋白含量。 結果  DP組牛頸靜脈帶瓣管道的管壁和瓣膜厚度、組織含水量與CO組比較差異均無統計學意義（Pgt;0.05），但管壁和瓣膜厚度均小于GA組（管壁:0.8±0.1 mm vs. 1.1±0.1 mm, 瓣膜: 0.2±0.1 mm vs. 0.3±0.1 mm, Plt;0.05），管壁和瓣膜組織含水量均大于GA組(管壁:86.1%±2.2% vs. 70.4%±2.8%,瓣膜: 87.1%±2.5% vs. 72.1%±3.1%, Plt;0.05)；DP組管壁和瓣膜熱皺縮溫度、斷裂強度與GA組比較差異無統計學意義（Pgt;0.05），但管壁和瓣膜熱皺縮溫度(管壁:84.7±1.4 ℃ vs. 70.4±0.3 ℃, Plt;0.05; 瓣膜:85.7±1.5 ℃ vs. 70.7±0.6 ℃,Plt;0.05)和斷裂強度(管壁:10.4±1.1 N vs. 6.8±1.0 N,Plt;0.05; 瓣膜: 8.0±0.9 N vs. 3.2±0.6 N,Plt;0.05)大于CO組。 結論 去細胞+染料介導光氧化聯合處理牛頸靜脈帶瓣管道具有較好的生物學特性。

染料介導光氧化處理去細胞豬主動脈瓣的生物學特性

目的 探討染料介導光氧化處理豬主動脈瓣膜的生物學特性，以期獲得性能良好的新型生物瓣膜材料。 方法 經去細胞處理的豬主動脈瓣30個，隨機分為3組。光氧化處理組（n=10）：去細胞瓣膜經染料介導光氧化處理；戊二醛處理組（n=10)：去細胞瓣膜采用戊二醛處理；去細胞對照組(n=10)：去細胞瓣不做固定處理，置于生理鹽水中備用。 分別測定并比較3組瓣膜的形態學改變、組織學特點、瓣膜厚度、含水量、熱皺縮溫度、斷裂強度和可溶性蛋白含量。 結果 光氧化處理組主動脈瓣呈淡藍色，瓣膜質地柔軟，彈性大，瓣葉無皺縮。光氧化處理組主動脈瓣瓣膜厚度較戊二醛處理組薄（0.26±0.09 mm vs. 0.38±0.08 mm;Plt;0.05），組織含水量較戊二醛處理組大（86.30%±4.03% vs. 71.10%±3.23%; Plt;0.05），熱皺縮溫度低于戊二醛處理組（76.30±0.70℃ vs. 87.70±0.30℃;Plt;0.05）；瓣膜厚度、組織含水量和熱皺縮溫度與去細胞對照組比較差異無統計學意義。光氧化處理組斷裂強度較去細胞對照組明顯增大（17.33±2.65 mPa vs. 9.11±0.95 mPa, Plt;0.05），可溶性蛋白含量較去細胞對照組明顯減少（0.039%±0.013% vs. 0.107%±0.024%; Plt;0.05），而與戊二醛處理組比較差異無統計學意義。 結論 染料介導光氧化處理去細胞豬主動脈瓣有較好的生物學特性。

神經干細胞與BMSCs 移植治療脊髓損傷的研究進展

【摘 要】 目的 綜述神經干細胞（neural stem cells，NSCs）與BMSCs 的免疫學特性及治療脊髓損傷（spinal cordinjury，SCI）的新進展。 方法 廣泛查閱近年國內外相關文獻，對NSCs 與BMSCs 的免疫學特性、移植治療SCI 的實驗研究與可能存在的問題進行分析。 結果 動物實驗表明NSCs 與BMSCs 移植可促進SCI 動物行為學改善，但由于兩種干細胞的免疫學特性，同種異體干細胞移植后將產生免疫排斥反應。 結論 NSCs 與BMSCs 對SCI 有很好的治療效果，但是免疫排斥問題值得考慮。

白芷活性提取物對人角質形成細胞生物學特性的影響

【摘 要】 目的 體外觀察白芷活性提取物對人皮膚角質形成細胞（keratinocytes，KC）生物學特性的影響，初步探討其促進創面愈合的可能機制。 方法 取人皮膚KC的HaCaT細胞株，復蘇培養取第5代細胞進行實驗。取白芷生藥95%乙醇提取后，將其活性提取物溶解于含0.25% FBS的DMEM培養液中，稀釋至5 × 10-2、5 × 10-3、5 × 10-4、5 × 10-5 g/L，分別與KC培養5 d后采用MTT法測定細胞增殖活性，以含0.25% FBS的DMEM培養作為對照。根據細胞增殖活性確定最佳濃度后，取KC分別采用最佳濃度白芷活性提取液（實驗組）及含0.25% FBS的DMEM（對照組）培養。培養48 h后流式細胞儀測定細胞周期，實時熒光定量PCR檢測細胞周期相關基因細胞周期素D1（cyclin D1）、凋亡相關基因天冬氨酸半胱氨酸酶3（Caspase-3）mRNA 的表達。 結果 培養5 d后，MTT測定5 × 10-4、5 × 10-3、5 × 10-2 g/L濃度可促進KC增殖，吸光度（A）值與對照組比較，差異均有統計學意義（P lt; 0.05）；其中5 × 10-3 g/L濃度組A值最高，確定為最佳濃度。實驗組S期及G2/M期細胞數量較對照組明顯增多，G0/G1期細胞數量明顯減少，差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。實驗組cyclin D1及Caspase-3 mRNA相對表達量均低于對照組，差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。 結論 白芷活性提取物能促進KC增殖，同時下調cyclin D1的表達加快細胞周期進程，下調Caspase-3的表達抑制細胞凋亡，以加快上皮化進程促進創面愈合。

反復凍融對同種異體人肌腱的生物力學影響

目的 分析反復凍融處理對同種異體人肌腱生物力學的影響，為同種異體移植物的處理與保存提供理論依據。 方法 從3 具自愿捐贈新鮮尸體上取30 根肌腱（指淺屈肌腱24 根、拇長屈肌腱6 根），隨機分為6 組，即新鮮組、凍融1 次組、凍融2 次組、凍融3 次組、凍融5 次組和凍融10 次組，每組指淺屈肌腱4 根，拇長屈肌腱1 根。檢測各組肌腱結構特性、力學性質及黏彈性變化等生物力學性質并進行比較。 結果 與新鮮組相比，拉斷試驗中凍融5 次組及凍融10 次組最大負荷、最大應力均明顯減小，差異均有統計學意義（P lt; 0.05），但最大拉伸及最大應變差異均無統計學意義（P gt; 0.05）。應力松弛試驗中，凍融5 次組及凍融10 次組應力松弛下降速度較快，與新鮮組相比差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。蠕變試驗出現相似結果，凍融5 次組及凍融10 次組在100 N 拉力作用下更早松弛，產生的蠕變較大，與新鮮組相比差異有統計學意義（P lt; 0.05）。凍融1 次、2 次、3 次組各指標與新鮮組比較差異均無統計學意義（P gt; 0.05）。 結論 對同種異體移植物經深低溫凍存后，凍存- 復蘇周期不宜超過3 個，多周期反復凍融將削弱同種異體肌腱的生物力學性質，使其更容易疲勞、斷裂。

臍帶Wharton 膠來源MSCs 生物學特性及其優越性的研究進展

目的 總結臍帶Wharton 膠來源MSCs（Wharton’s jelly-MSCs，WJ-MSCs）生物學特性及其優越性的研究進展。 方法 查閱近年來關于WJ-MSCs 的生物學特性及其與臍帶血MSCs（umbilical cord blood MSCs，UBMSCs）和BMSCs 相比較的文獻，進行綜述分析。 結果 從臍帶Wharton 膠中可分離獲得大量具有自我復制、自我更新、高度增殖和多向分化潛能的MSCs。與UBMSCs 和BMSCs 相比較，WJ-MSCs 在分離時間、分離成功率、倍增時間、傳代數量和擴增潛能等方面均具有優越性。 結論 WJ-MSCs 具有取材簡便、來源豐富、相對純凈、無倫理問題等優點，是細胞移植治療、基因治療和組織工程器官構建的理想種子細胞，為組織再生修復與原位重建提供了新思路。

載銀納米抗菌復合骨填充材料體外抗菌及緩釋性能研究

目的 TiO2 載銀納米羥基磷灰石/ 聚酰胺66（titania and Ag containing nano-hydroxyapatite/polyamide66，TiO2-Ag-nHA/PA66）復合骨填充材料具有良好的生物相容性及安全性，通過觀察含不同Ag+ 濃度的TiO2-Ag-nHA/PA66 復合骨填充材料的體外抗菌性能及Ag+ 釋放特性，探討其用于填充慢性骨髓炎術后骨缺損的可行性。 方 法 采用常壓共溶法合成n-HA/PA66 復合骨填充材料A1（材料A1），并在其基礎上制備Ag+ 含量分別為0.22wt%、0.64wt%，TiO2 含量均為2.35wt% 的TiO2-Ag-nHA/PA66 復合骨填充材料A2、A3（材料A2、A3）。將材料A2、A3 分別浸泡于50 mL 模擬體液（simulated body fluid，SBF）中，于1、3、7、14、21、49 d 采用原子吸收光譜法檢測Ag+ 濃度。采用抑菌圈實驗、菌落數實驗檢測材料A2、A3 對金黃色葡萄球菌及大腸桿菌的體外抗菌效果，采用掃描電鏡觀察其對金黃色葡萄球菌及大腸桿菌的抗黏附效果；并以材料A1 作對照。 結果 在SBF 中浸泡1、3 d 材料A2、A3 的Ag+ 濃度比較，差異無統計學意義（P gt; 0.05）；7 d 后差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。抑菌圈實驗顯示材料A2、A3 第1 天時對2 種細菌的抑菌圈直徑均最大，其中材料A2 對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑菌圈直徑分別為（13.40 ± 2.88）mm 及（9.40 ± 1.14） mm，材料A3 分別為（23.60 ± 1.14）mm 及（18.80 ± 0.84）mm；同種細菌間2 種材料比較，差異有統計學意義（P lt; 0.05）；之后隨時間增加抑菌圈直徑縮小，材料A2、A3 產生的抑菌圈在金黃色葡萄球菌和大腸桿菌中持續時間分別為15、33 d 和9、24 d；材料A1 無抑菌圈產生。菌落數實驗顯示金黃色葡萄球菌、大腸桿菌與材料A1 接觸后繼續生長繁殖，抗菌率為0；與材料A2、A3 接觸后生長顯著減緩，抗菌率分別為89.74% ± 3.62%、94.18% ± 2.05%及78.65% ± 5.64%、85.96% ± 2.50%，同種細菌組間比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。掃描電鏡觀察材料A1 表面有大量細菌黏附，呈團塊狀或線狀分布；材料A2、A3 表面黏附細菌明顯較少，呈散在分布。 結論 TiO2-Ag-nHA/PA66 復合骨填充材料在體外對金黃色葡萄球菌及大腸桿菌有明顯抗菌作用，在SBF 中具有良好的緩釋效果。