目的 細胞外基質（extracellular matrix，ECM）因其良好的生物安全性和生物相容性，以及具有細胞識別及黏附位點等優勢而廣泛用作組織工程支架材料。探討神經來源天然ECM 的制備方法及用于神經組織工程支架的可行性。 方法 收集新鮮犬坐骨神經10 根，采用低滲凍融、機械粉碎、差速離心法制備神經ECM。采用掃描電鏡觀察其形態特征；Ⅰ型膠原、層粘連蛋白、纖維連接蛋白免疫熒光染色觀察其組成成分，并用Hoechst33258 熒光染色檢測其去細胞程度；行天狼猩紅、番紅O、甲苯胺藍染色，對其成分進行定性分析；采用生化定量檢測神經ECM 中總膠原和葡萄糖胺聚糖（glycosaminoglycan，GAG）的含量；將大鼠背根神經節和大鼠雪旺細胞分別與神經ECM 膜共培養，采用免疫熒光染色觀察神經組織以及細胞在ECM 膜上的生物相容性。 結果 掃描電鏡觀察示神經ECM 為直徑30 ～ 130 nm 的二維納米微絲。免疫熒光染色示Ⅰ型膠原、層粘連蛋白、纖維連接蛋白染色均呈陽性；Hoechst33258 熒光染色提示神經ECM 去細胞完全。組織化學染色示天狼猩紅、番紅O、甲苯胺藍染色均呈陽性。生化成分定量檢測神經ECM 總膠原含量為（114.88 ± 13.33）μg/mg 干重，與正常神經組織的（54.07 ± 5.06） μg/ mg 干重比較，差異有統計學意義（P lt; 0.01）；神經ECM 的GAG 含量為（17.52 ± 2.34）μg/mg 干重，與正常神經組織的（25.25 ± 1.56） μg/mg 干重比較，差異無統計學意義（P gt; 0.05）。大鼠背根神經節培養7 d 后，可見神經絲蛋白200 免疫熒光染色呈陽性；大鼠雪旺細胞培養2 d 后，可見S100 免疫熒光染色呈陽性。 結論 神經ECM 富含Ⅰ型膠原、層粘連蛋白、纖維連接蛋白等成分，具有良好的細胞相容性，可作為一種理想的神經組織工程支架材料。
目的 探討化學去細胞異體神經復合緩釋神經生長因子（nerve growth factor，NGF）修復周圍神經缺損的效果。 方法 采用藥物微球技術制備NGF 微球，與生物纖維蛋白膠混合形成NGF 復合緩釋制劑。取健康雄性SD 大鼠20 只，體重280 ～ 300 g，制備化學去細胞異體神經。取健康雄性Wistar 大鼠52 只，體重250 ～ 300 g，制備大鼠左側坐骨神經10 mm 缺損模型。根據修復缺損材料不同，隨機分成4 組（n=13）：自體神經移植組（A 組）、化學去細胞異體神經移植加NGF 復合緩釋制劑組（B 組）、化學去細胞異體神經移植組（C 組）和化學去細胞同種異體神經移植和纖維蛋白膠組（D 組）。右側不作處理作為空白對照組。術后行大體觀察；術后2 周測量神經軸突生長距離；術后16 周行電生理檢測，計算術側坐骨神經運動傳導速度恢復率、術側小腿三頭肌收縮力恢復率及濕重恢復率，并行移植神經吻合中段HE 和半薄切片甲苯胺藍染色觀察。 結果 所有動物均存活至實驗完成，切口愈合良好。術后2 周A 組神經再生距離較其余3 組長（P lt; 0.05），B 組優于C、D 組（P lt; 0.05），C、D 組間比較差異無統計學意義（P gt; 0.05）。術后16 周，A、B、C、D 組術側坐骨神經運動傳導速度恢復率分別為73.37% ± 7.82%、70.39% ± 8.45%、53.51% ± 6.31%、55.28% ± 5.37%；A、B 組與C、D 組比較，差異有統計學意義（P lt; 0.05）。A、B、C、D 組術側小腿三頭肌收縮力恢復率分別為85.33% ± 5.59%、69.79% ± 5.31%、64.46% ± 8.49%、63.35% ± 6.40%；A 組與B、C、D 組比較差異有統計學意義（P lt; 0.05），B、C、D 組間比較差異無統計學意義（P gt; 0.05）。A、B、C、D 組術側小腿三頭肌濕重恢復率分別為62.54% ± 8.25%、53.73% ± 4.56%、46.37% ± 5.68%、45.78% ± 7.14%；A 組與B、C、D 組比較差異有統計學意義（P lt; 0.05），B 組與C、D 組比較差異有統計學意義（P lt; 0.05），C、D 組間比較差異無統計學意義（P gt; 0.05）。組織學圖像分析示B 組有髓神經纖維數量、軸突直徑及髓鞘厚度均優于C、D 組（P lt; 0.05），B 組軸突直徑小于A 組（P lt; 0.05）。 結論 復合緩釋NGF 的化學去細胞同種異體神經能滿意修復一定長度的周圍神經缺損，是一種有效的周圍神經組織工程修復材料。
目的比較鎂合金與聚乳酸-羥基乙酸共聚物[poly（lactic-co-glycolic acid），PLGA]在體內降解情況，同時采用Micro-CT深入研究鎂合金體內降解規律。 方法取3月齡雄性新西蘭大白兔40只，分別于右側和左側股骨髁鉆孔植入40個表面微弧氧化處理的AZ31鎂合金棒（鎂棒）和40個PLGA棒。術后4、8、12、16周各處死10只動物，取出雙側股骨髁，采用Micro-CT掃描及生成數據定量評價植入物降解情況；然后取出植入物清洗、烘干后稱重，與術前重量差值作為植入物降解量；HE染色觀察局部炎性反應情況。并將鎂合金的失重情況與Micro-CT的評價結果進行對比。 結果Micro-CT掃描示，PLGA棒不顯影。術后4周鎂棒幾乎無降解痕跡，有少量腐蝕點；術后8周在4周原有腐蝕點基礎上逐步擴大，縱軸與橫截面交界邊緣變得模糊；至術后16周鎂棒表面腐蝕面積更大，邊緣已不連續。Micro-CT定量分析示：術后4、8周鎂棒體積分數下降緩慢；術后12、16周較術后4、8周降低明顯，16周最低，差異均有統計學意義（P < 0.05）。術后隨時間延長鎂礦物密度持續降低，12～16周降低速度最快，第8周后各時間點間比較差異均有統計學意義（P < 0.05）；而鎂CT圖像密度隨術后時間延長變化很小（P>0.05）。術后隨時間延長鎂棒表面積與體積比持續增加，術后12、16周明顯高于4、8周，且16周高于12周（P < 0.05）。術后隨時間延長，鎂棒表面腐蝕點越來越多，導致橫截面半徑減小，即平均骨小梁厚度逐漸降低，8周后各時間點間差異均有統計學意義（P < 0.05）。失重法檢測示：術后隨時間延長，兩種材料降解量均逐漸增加（P < 0.05）；術后8、12周，鎂棒降解量均顯著低于PLGA棒（P < 0.05），但術后16周時鎂棒降解量已超過PLGA棒。將各時間點鎂棒質量分數與Micro-CT方法得出的體積分數進行比較，結果顯示兩個指標的變化趨勢相近，但各時間點鎂棒質量分數均低于體積分數，且在第8、12、16周差異有統計學意義（P < 0.05）。HE染色示，術后4周鎂棒周圍可見輕度炎性反應，但隨時間延長炎性反應逐漸減輕，至16周時已未見炎性反應；而PLGA周圍一直無炎性反應。 結論采用Micro-CT檢測鎂合金降解情況具有無創、可活體檢測、定量、精確的優勢。鎂合金和PLGA在體內均隨時間推移而逐步腐蝕，經歷先緩慢后加速的持續降解過程；PLGA在體內降解則更早、更快，至16周時鎂合金降解量已超過PLGA，鎂合金密度在降解過程中無明顯變化。鎂合金在金屬與原骨之間產生新生骨橋欠充分，仍缺乏足夠的無縫連接能力。
目的 采用化學去細胞法處理犬顱外段全面神經的免疫原性成分，通過不同組織學染色，對化學去細胞神經的結構和雪旺細胞、髓鞘殘留情況進行觀察。 方法 雜種犬10 只，體重（18 ± 3）kg，處死后取新鮮犬頭顱10 個，解剖、分離犬顱外段雙側面神經主干及各分支（顳支、顴支、頰支、下頜緣支、頸支），共20 根。將20 根犬全面神經隨機分為實驗組（n=12）和對照組（n=8）。參照Sondell 法，用3%TritonX-100 和4% 脫氧膽酸鈉溶液對實驗組犬全面神經進行化學萃取；對照組不作處理。對兩組面神經分別行HE 染色、Hoechst33258 熒光染色及雪旺細胞P75、髓鞘相關蛋白Zero、層粘連蛋白（Laminin）免疫熒光組織化學染色觀察。 結果 各種組織學染色觀察顯示，實驗組面神經主要免疫原性物質、雪旺細胞和髓鞘均徹底去除，促神經生長成分Laminin 保留，且神經結構保存完好。實驗組犬面神經主干及5 個分支具有相似的觀察結果。 結論 化學去細胞處理后的犬全面神經，具有良好的天然面神經一主干五分支結構，可能是修復全面神經缺損的良好移植物。
目的介紹一種不脫鈣骨組織的冰凍切片法，通過觀察骨和軟骨內的熒光分布，探討該方法的可行性。 方法取健康成年雄性綠色熒光蛋白轉基因SD大鼠膝關節，經包埋劑包埋，置于冰凍切片機中，將表面涂有合成橡膠的薄膜黏附于包埋塊表面，行膝關節組織切片。熒光顯微鏡及光鏡下觀察切片組織內熒光表達及結構；并行Ⅰ、Ⅱ型膠原免疫熒光染色和HE、甲苯胺藍、茜素紅染色，觀察軟骨及骨的結構及熒光分布特征。 結果制備的大鼠膝關節冰凍切片厚度均為6 μm，大體觀察示關節各結構均完整切割，光鏡下能清晰分辨切片軟骨各層細胞形態以及軟骨下骨、骨小梁排列走行。熒光顯微鏡下觀察，可見關節周圍軟組織、軟骨及骨組織呈綠色熒光，Ⅰ型膠原在骨組織表達，Ⅱ型膠原在軟骨組織表達。HE染色及甲苯胺藍染色能清晰分辨軟骨層形態結構。茜素紅染色示軟骨下骨板、半月板內部組織結構完整，而且脛骨近端的皮質骨連續性存在。 結論采用冰凍切片法制備不脫鈣骨組織切片，可直接觀察骨、軟骨組織內熒光物質的分布，縮短骨組織切片的制備周期。
目的利用靜電紡絲技術制備聚己內酯（polycaprolactone，PCL）/Ⅰ型膠原納米纖維取向性補片，對其進行理化表征和生物性能評價，探討其作為肩袖修復人工合成材料的可行性。方法利用靜電紡絲技術分別使用質量比 10%PCL 靜電紡絲溶液制備單純 PCL 納米纖維補片（對照組），以及含 25%Ⅰ型膠原的 PCL 混合靜電紡絲溶液制備 PCL/Ⅰ型膠原納米纖維補片（實驗組）。取兩種補片行大體及掃描電鏡觀察支架形態及微觀結構并測量纖維直徑和孔隙率，行單軸拉伸試驗檢測補片的力學性能，使用傅氏轉換紅外線光譜分析儀對補片成分進行分析，測量補片表面接觸角。將兩種補片浸提液與第 3 代兔肌腱干細胞復合培養，細胞計數試劑盒 8（cell counting kit 8，CCK-8）法檢測材料毒性和細胞增殖情況，以正常培養細胞作為空白對照組；將兔肌腱干細胞復合于兩種補片上，體外培養 3 d 后進行死/活細胞染色，共聚焦激光掃描顯微鏡下觀察細胞在補片上的黏附和活性。結果大體及掃描電鏡觀察示，兩種補片纖維均呈取向性排列，實驗組補片纖維直徑顯著小于對照組（t=26.907，P=0.000），孔隙率顯著大于對照組（t=2.506，P=0.032）。實驗組補片的纖維拉伸強度和楊氏模量均顯著高于對照組，差異有統計學意義（t=3.705，P=0.029；t=4.064，P=0.034）。紅外光譜分析示，實驗組補片中 PCL 和Ⅰ型膠原成功混合。實驗組補片表面接觸角為（73.88±4.97）°，為親水的；而對照組補片表面接觸角為（128.46±5.10）°，為疏水的；兩組表面接觸角比較差異有統計學意義（t=21.705，P=0.002）。隨培養時間延長，各組細胞吸光度（A）值均逐漸增加，各時間點實驗組和對照組 A 值比較差異均無統計學意義（P>0.05）。共聚焦激光掃描顯微鏡觀察示，培養 3 d，兔肌腱干細胞在兩種補片表面均可黏附、生長，實驗組補片表面黏附的細胞數量多于對照組，且活性更好。結論利用靜電紡絲技術制備的 PCL/Ⅰ型膠原納米纖維取向性補片具有優良的理化性能及細胞黏附性能，無細胞毒性，未來可作為肩袖修復理想的組織工程補片。