目的 BMSCs 具有多向分化潛能，在不同培養條件下能夠向多種細胞分化，但年齡對BMSCs 分化的影響尚不明確。探討雪旺細胞（Schwann cells，SCs）形成的體外微環境對不同年齡大鼠BMSCs 向神經元和少突膠質細胞分化的影響。 方法 從幼年（1 月齡）Wistar 大鼠預變性坐骨神經中分離純化SCs，從幼年（1 月齡）、成年（6 月齡）、老年（12 月齡）Wistar 大鼠骨髓中提取BMSCs，均行免疫熒光鑒定。將第3 代SCs 與PKH26 標記的第2 代BMSCs 在雙層培養皿內等體積、等密度共培養，根據BMSCs 來源不同將實驗分為3 組：A、B、C 組SCs 分別與幼年（1 月齡）、成年（6 月齡）、老年（12 月齡）大鼠BMSCs 共培養。倒置相差顯微鏡下觀察分化過程中BMSCs 形態變化，免疫熒光染色檢測共培養后第7 天BMSCs 分化表達神經特異性烯醇化酶（neuron-specific enolase，NSE）和磷脂堿性蛋白（myelin basic protein，MBP）的情況，ELISA 法檢測各組細胞共培養0、3、6、9、12 d 培養液上清神經調節蛋白1（neuregulin 1，NRG1）的表達。 結果 實驗成功分離并培養SCs 和 BMSCs，免疫熒光鑒定SCs 呈S-100 陽性表達，BMSCs 呈CD29 陽性表達、CD44 陽性表達、CD90 陽性表達。細胞共培養第7 天倒置相差顯微鏡觀察示，A 組BMSCs 胞體回縮，呈圓形或錐形，并帶有突起，形態類似神經組織細胞；B、C 組大部分BMSCs 形態無明顯改變。細胞共培養第7 天免疫熒光染色示，A、B、C 組BMSCs 的NSE 陽性表達率分別為22.39% ± 2.86%、12.89% ± 1.78% 和2.69% ± 0.80%，MBP 陽性表達率分別為16.13% ± 2.39%、6.33% ± 1.40% 和0.92% ± 0.17%，各組間NSE 陽性表達率和MBP 陽性表達率比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。ELISA 法檢測示，A 組細胞培養液上清中NRG1 含量于細胞共培養后逐漸增多，且呈時間依賴性增加；細胞共培養6、9、12 d，A 組NRG1 含量高于B、C 組，B 組高于C 組，比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。 結論 不同年齡大鼠BMSCs 與SCs 共培養均可向神經元和少突膠質細胞分化，但分化能力隨年齡增加而降低，SCs 分泌的多種生長因子可能是誘導BMSCs 分化的重要因素。
探討體外雙軸拉伸應變對大鼠骨髓間充質干細胞（rBMSCs）向成骨細胞分化的影響。分離4周齡SD大鼠BMSCs，將P3～P4代rBMSCs接種于DMEM-LG完全培養基的雙軸拉伸應變細胞培養小室中。當細胞生長至亞融合狀態后，給予細胞施加拉伸應變，頻率為1 Hz，應變幅度為1%、2%、5%，每個應變幅度均分別加載2 h/d、4 h/d、6 h/d，連續作用3 d。以未受拉伸應變的rBMSCs為空白對照組。以未受拉伸應變，含100 nmol/L雌二醇（E2）培養的rBMSCs為陽性對照組。通過實時熒光定量PCR和Western blot方法檢測各組rBMSCs的堿性磷酸酶（ALP）、Ⅰ型膠原（ColⅠ）、Runt相關轉錄因子-2（Runx2）、骨鈣蛋白（OCN）mRNA和蛋白的表達量。實驗結果表明：（1）E2組rBMSCs中Runx2、ColⅠ、ALP、OCN mRNA及蛋白表達量均明顯高于空白對照組（P＜0.05）；（2）1%拉伸應變組rBMSCs中ALP、Runx2 mRNA和蛋白表達量均明顯高于空白對照組（P＜0.05），但與E2組相比明顯降低（P＜0.05）；（3）2%拉伸應變組rBMSCs中ALP、ColⅠ、Runx2、OCN mRNA和蛋白表達量均明顯高于空白對照組（P＜0.05），其中，加載時間4 h/d組rBMSCs中ColⅠ、Runx2 mRNA和蛋白表達量明顯高于E2組（P＜0.05）；（4）5%拉伸應變組，加載時間2 h/d、4 h/d組rBMSCs中ALP、ColⅠ、Runx2 mRNA和蛋白表達量均明顯高于空白對照組（P＜0.05），與E2組相比，加載時間4 h/d組的ColⅠ、Runx2 mRNA和蛋白表達量也明顯上調（P＜0.05）。本實驗結果提示，雌二醇和體外雙軸拉伸應變均可以誘導rBMSCs向成骨細胞分化，且拉伸應變幅度2%、加載時間4 h/d時，促rBMSCs成骨分化的作用最強。