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        華西醫學期刊出版社
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        找到 作者 包含"王月田" 1條結果
        • 軟骨源性形態發生蛋白1轉基因細胞片的初步探討

          目的探討軟骨源性形態發生蛋白1(cartilage-derived morphogenetic protein 1,CDMP1)轉基因細胞片的構建及其活性鑒定。 方法取1月齡新西蘭白兔骨髓分離培養BMSCs,取第3~6代細胞進行實驗。實驗分為3組,A組:腺病毒(adenovirus,Ad)-巨細胞病毒(cytomegalovirus,CMV)-人CDMP1(human CDMP1,hCDMP1)-內部核糖體進入位點(internal ribosome entry site,IRES)-增強型綠色熒光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)轉染BMSCs,B組:Ad-CMV-EGFP(空載體腺病毒)轉染BMSCs,C組:未轉染的BMSCs。倒置熒光顯微鏡觀察3組細胞熒光表達情況,MTT法檢測3組細胞增殖活力。將3組處于對數生長期的細胞接種于溫度敏感性6孔板獲得細胞片,行形態學及HE染色觀察,RT-PCR及Western blot檢測3組細胞片hCDMP1和Ⅱ型膠原mRNA及蛋白表達,阿利新藍染色檢測糖胺聚糖(glycosaminoglycans,GAG)表達。 結果倒置熒光顯微鏡下觀察示轉染細胞在72 h表達明亮熒光,轉染效率達90%;MTT法檢測示,3組細胞生長曲線基本呈S形,培養1~9 d吸光度(A)值比較差異均無統計學意義(P>0.05)。通過溫度敏感性6孔板體外可成功收獲完整的三維立體細胞片結構,RT-PCR及Western blot檢測示,A組細胞片中hCDMP1和Ⅱ型膠原mRNA及蛋白均呈陽性表達,B、C組均為陰性。HE染色和阿利新藍染色示,A組纖維組織豐富,細胞外基質較多,藍色異染顆粒多;B、C組細胞外基質相對較少,無明顯特異性藍染顆粒;A組GAG陽性染色面積明顯低于B、C組,灰度值明顯高于B、C組(P<0.05)。 結論hCDMP1基因轉染的BMSCs細胞片能表達Ⅱ型膠原和GAG,具有成軟骨活性,其克服了傳統組織工程中細胞利用率低、支架異質性等缺點,有望構建出致密的組織工程軟骨,為軟骨組織工程進一步發展提供了新思路。

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