目的 探討磷酸化的哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(p-roTOR)在非小細胞肺癌(NSCLC) 中的表達及其對預后的預測價值。方法 運用免疫組織化學EnVision法檢測59例NSCLC肺癌組織和10例非肺癌組織(3例肺結核和7例炎性假瘤)中p-mTOR蛋白的表達。結果 p-mTOR在肺 良性疾病組均為陰性，在NSCLC組織中表達的陽性率為40.7％，顯著高于肺良性疾病組（χ2=6.237，P=0.013）；p-mTOR在NSCLC組織中的表達與性別、年齡和pTNM分期有關，而與其他臨床 病理參數(腫瘤大小、病理類型和淋巴結轉移情況)無明顯相關性。Kaplan-Meire生存分析顯示， p-mTOR與生存期無明顯相關(Log rank檢驗P=0.055)。結論 檢測p-mTOR有助于肺部良惡性疾病的鑒別，單獨p-mTOR不能作為判斷NSCLC預后的參考指標。
目的 通過比較瘢痕疙瘩及正常皮膚中細胞外信號調節激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）、應激活化蛋白激酶（c-Jun amino-terminal kinase，JNK）信號通路的表達，探討其在瘢痕疙瘩形成中的作用。 方法 取四川大學華西醫院燒傷整形科收治的26 例患者皮膚組織，其中行瘢痕疙瘩切除患者（實驗組）16 例，瘢痕疙瘩形成時間8 個月～ 10 年；胸部6 例，耳垂4 例，會陰部2 例，肩部3 例，腹部1 例；均經病理檢查確診為瘢痕疙瘩。10 例整形手術患者自愿捐贈的正常皮膚作為對照組，腹部4 例，大腿3 例，肩部2 例，背部1 例。取標本采用Envision 二步法行免疫組織化學染色，觀察磷酸化及非磷酸化JNK 和ERK 表達情況，并采用Image Pro Plus 4.5 圖像分析系統測定積分吸光度（IA）值，觀察陽性染色強度。 結果 免疫組織化學染色觀察顯示，對照組正常皮膚成纖維細胞中未見明顯的磷酸化及非磷酸化ERK、JNK 陽性表達；而實驗組主要在成纖維細胞中表達，陽性顆粒主要位于細胞質和細胞核內。實驗組磷酸化ERK 及JNK 的IA 值明顯高于對照組（P lt; 0.05），非磷酸化ERK 及JNK 兩組間差異無統計學意義（P gt; 0.05）。 結論 磷酸化JNK、ERK 信號通路蛋白在瘢痕疙瘩中異常高表達，提示該通路可能與瘢痕疙瘩形成密切相關。
目的 通過構建殼聚糖/ 亞磷酸化殼聚糖復合海綿，與人臍帶間充質干細胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells，hUCMSCs）復合構建組織工程骨并行成骨誘導培養，探討其異位成骨效果，為骨組織工程尋找理想支架材料。 方法 在殼聚糖分子中引入亞磷酸根基團，制備亞磷酸化殼聚糖，并進行表征。分別將濃度為2% 的殼聚糖和亞磷酸化殼聚糖溶液，按1 ∶ 1 體積比混合均勻，構建殼聚糖/ 亞磷酸化殼聚糖復合海綿；然后在模擬體液中進行原位礦化，通過掃描電鏡觀察礦化前后復合海綿的結構。用酶消化法分離培養hUCMSCs，取生長良好的第3 代細胞與殼聚糖/ 亞磷酸化殼聚糖復合海綿復合培養，構建細胞- 支架復合物，并行成骨誘導培養。成骨誘導培養1、2 周，分別于光鏡及掃描電鏡下觀察細胞黏附情況；培養1、2、3、4、5、6 d 時，MTT 法分析細胞增殖情況。取3 ～ 4 月齡新西蘭大白兔40只，雌雄不限，體重2.1 ～ 3.2 kg，平均2.5 kg；制備雙側豎脊肌肌袋，在每只兔右側肌袋內植入細胞- 支架復合物（A 組，n=40），于其中20 只兔左側肌袋植入殼聚糖/ 亞磷酸化殼聚糖復合海綿（B 組，n=20），剩余20 只兔左側肌袋不植入材料（C組，n=20）。術后觀察動物一般情況，4 周后處死動物取材，行大體及組織學觀察。 結果 亞磷酸化殼聚糖分析表明亞磷酸化反應主要發生在羥基上，其質子類型和化學位移強度與化學結構一致。掃描電鏡觀察到殼聚糖/ 亞磷酸化殼聚糖復合海綿孔洞均勻，孔壁較薄；原位礦化后孔壁表面有鈣磷涂層，晶體顆粒生成；細胞在殼聚糖/ 亞磷酸化殼聚糖復合海綿支架上黏附、生長良好。體內實驗大體觀察A 組可見細胞- 支架復合物大小、形態基本保持原狀，質地有所增韌，材料周圍有薄層結締樣組織；B 組復合海綿體積縮小，質地松軟；C 組肌袋手術創口已愈合。組織學觀察A 組支架材料部分吸收，邊緣有均質類骨物質出現，并見成骨細胞；B 組植入區形成圓形空腔，殘留殼聚糖支架網絡；C 組創面基本愈合，肌肉纖維間可見少量淋巴細胞浸潤。 結論 殼聚糖/ 亞磷酸化殼聚糖復合海綿是一種具有良好生物相容性的支架材料，與hUCMSCs 復合構建的組織工程骨在兔體內可異位成骨。
目的 探討血小板源性生長因子(platelet-derived growth factor, PDGF)刺激成骨細胞，對磷酸化細胞外信號調節激酶1/2(phosphorylation extracellular signalregulated kinase1/2, pERK1/2)位置的影響。方法出生3 d清潔級健康小鼠10只，雌雄不拘，體重6～9 g。取小鼠顱骨，分離培養原代成骨細胞。取第6代成骨細胞，1%血清培養液培養12 h后, 隨機分成經10 μmol/L PP2處理30 min組(實驗組)和未處理組(對照組)，每組再隨機分成2個亞組: 其中一組用PDGF (20 ng/ml)刺激10 min，另一組不用PDGF刺激，采用免疫組織化學染色檢測pERK1/2分布。另取第6代成骨細胞，當細胞生長至80%融合時，用細胞刮隨機分成2組，一組用10 μmol/L PP2預處理30min（實驗組），另一組不用PP2作用（對照組），再用20 ng/ml PDGF培養12 h，采用劃痕愈合法檢測PP2對成骨細胞在PDGF刺激下遷移能力的影響。另取第6代成骨細胞，調整細胞濃度1×106/ml，隨機分成2組，分別經DMSO（對照組）和10 μmol/LPP2(實驗組)預處理30min，每組再隨機分成2個亞組: 其中一組用PDGF(20 ng/ml)刺激10 min，另一組不用PDGF剌激，采用Western blot檢測細胞骨架蛋白內pERK1/2活性。結果 免疫熒光染色結果顯示，PDGF促進pERK1/2定位于成骨細胞的局部黏附和細胞核內; 而PP2顯著抑制了由PDGF刺激引起的pERK1/2定位于成骨細胞的局部黏附, 但并不影響pERK1/2定位于細胞核內。細胞劃痕愈合實驗顯示，PP2明顯抑制了由PDGF所誘導的成骨細胞遷移。Western blot檢測結果顯示，PP2明顯抑制了由PDGF所誘導的成骨細胞局部黏附內ERK1/2的磷酸化。結論 PDGF通過激活Src活性，促進pERK1/2定位于成骨細胞的局部黏附內;PP2通過抑制pERK1/2定位于成骨細胞的局部黏附，從而抑制由PDGF所誘導的成骨細胞遷移。
目的 研究磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）和磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）在人膀胱尿路上皮癌組織中的表達特征及臨床意義。 方法 2005年6月－2010年7月，采用免疫組織化學法檢測40例膀胱尿路上皮癌組織及10例正常膀胱組織PI3K與p-Akt的表達，并對結果進行統計學分析。 結果 PI3K和p-Akt在正常膀胱黏膜組織陽性表達率均低于膀胱尿路上皮癌組織中，差異均有統計學意義（P＜0.05）。同一標本中PI3K和p-Akt的表達不具有相關性（r=0.051，P=0.747）。 結論 PI3K、p-Akt在膀胱尿路上皮癌中高表達，兩者在膀胱尿路上皮癌中共同促其發展，但其在膀胱尿路上皮癌的預后和進展中的作用尚不明確。
目的 通過檢測異染色質蛋白1α（HP1α）在DNA損傷后的磷酸化狀況，介紹一種用磷酸化標簽(phos-tag)試劑檢測磷酸化蛋白質的新方法。 方法 取雄雌C57小鼠交配后孕13.5 d胚胎，分離并原代培養小鼠胚胎成纖維細胞。對照組及實驗組(6個損傷時間點)各取2個100 mm培養皿的細胞進行實驗，實驗組細胞用喜樹堿進行DNA損傷；對照組用等量的二甲基亞砜處理。用摻入phos-tag的十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白并轉印，將膜用抗HP1α的抗體孵育，用偶聯辣根過氧化物酶的抗體做二抗，通過成像系統檢測蛋白。 結果 實驗組存在一條與HP1α有明顯不同遷移率的磷酸化HP1α條帶，與對照組相比DNA損傷后磷酸化HP1α含量一過性增多。 結論 HP1α被DNA損傷誘導為磷酸化狀態，提示其可能在DNA修復過程中扮演重要角色。 Phos-tag 蛋白質印跡法可采用普通抗體檢測磷酸化的蛋白，是一種簡便易行的檢測未知磷酸化蛋白質的新方法。
目的 總結鈣離子結合酪氨酸磷酸化調解基因的特征及其在腫瘤發病中的意義。方法 通過復習國內外文獻，回顧分析鈣離子結合酪氨酸磷酸化調解基因參與調節的信號通路及其在多種腫瘤中的研究現狀。結果 鈣離子結合酪氨酸磷酸化調解基因通過多種機理誘導細胞增殖異常，多種腫瘤的發生與鈣離子結合酪氨酸磷酸化調解基因的異常表達密切相關。在分布不同的上皮性腫瘤中，鈣離子結合酪氨酸磷酸化調解基因參與調節的通路相同，作用靶點相似。結論 鈣離子結合酪氨酸磷酸化調解基因的進一步深入研究有望為闡明腫瘤的發生、發展機理提供新的途徑，并且可以作為早期診斷及輔助治療的重要手段。
目的 研究胰腺癌和慢性胰腺炎組織中胸苷磷酸化酶（TP）表達水平和淋巴管計數，探討兩者的臨床病理意義及在胰腺癌中的相互關系。方法 51例胰腺癌和10例慢性胰腺炎手術切除標本常規制作石蠟包埋切片，TP表達的檢測和淋巴管計數均采用SP免疫組化法。結果 胰腺癌TP表達陽性率（54.9%）和淋巴管計數〔（12.5±4.3） 個/HP〕明顯高于慢性胰腺炎TP表達陽性率（20.0%）和淋巴管計數〔（5.2±2.4）個/HP〕，P＜0.05， P＜0.01； 高分化胰腺癌和未轉移病例TP表達陽性率和淋巴管計數明顯低于低分化胰腺癌和轉移病例（P＜0.05，P＜0.01）； TP表達陽性的胰腺癌淋巴管計數明顯高于陰性表達者〔(13.8±3.4)個/HP vs （10.9±3.2）個/HP〕，P＜0.01。 結論 TP表達和淋巴管計數均為反映胰腺癌進展、轉移等生物學特性及預后的重要標記物，胰腺癌細胞分泌的TP可能促進淋巴管生成。
【摘要】目的通過臨床肝臟能量代謝研究，探索一套評價肝儲備功能，減少手術侵襲及合理進行術后保肝支持治療的圍手術期處理方案。方法回顧性分析我院1990年1月至2004年1月共14年間收治的2 143例肝癌病例的術前資料、手術治療情況、術后處理和臨床過程以及隨訪資料。將病例分為前期組（前7年）和后期組（后7年）進行比較，同時對術前磷酸化耐受指數（RTI）測定、術中半肝血流阻斷及術后連續定時的動脈血酮體比率（AKBR）測定進行分析，并比較其價值。結果①兩組比較顯示，后期組小肝癌比例增加，手術切除率增加，術后并發癥及死亡率下降，長期生存率提高； ②采用術前RTI測定來指導手術方式選擇，使術后并發癥發生率由21.1%降至11.0%，手術死亡率由1.6%降至0.3%； ③術中采用全入肝血流阻斷（n=476）與半肝血流阻斷技術（n=523）相比較，術后并發癥率及手術死亡率分別由25.8%及2.3%降至11.9%及0.6%，住院時間平均縮短3.5 d； ④術后采用連續AKBR監測以指導術后保肝、支持治療，對及時處理和預防肝衰有重要價值。結論肝切除術圍手術期采用肝能量代謝指標（RTI、AKBR）測定，可以準確、有效地評價肝儲備功能，指導手術切除范圍并合理進行術后保肝、支持治療； 術中采用半肝血流阻斷技術可有效降低手術侵襲，保護殘肝功能。合理的圍手術期處理是降低手術并發癥及死亡率的重要因素。
目的檢測大腸癌組織中尿激酶型纖溶酶原激活劑（uPA）和糖原合成酶激酶-3β磷酸化（P-GSK3β）的表達并探討其意義。 方法選取2006年1月－2010年12月大腸癌手術切除標本78例，采用微波EliVisionTM免疫組織化學法檢測78例大腸癌、30例大腸腺瘤和20例正常大腸黏膜中uPA和P-GSK3β的表達。 結果大腸癌組織中uPA和P-GSK3β陽性表達定位于細胞質，其表達明顯高于正常大腸黏膜組織和大腸腺瘤組織（P＜0.05）。uPA和P-GSK3β陽性表達與組織分化程度、淋巴結轉移、臨床病理分期有關（P＜0.05）；兩者間表達呈正相關（P＜0.05）。 結論uPA和P-GSK3β在大腸癌中呈高表達，且與大腸癌的發生、發展和轉移密切相關。